Die TOPO™ TA Cloning™ Kits für die Subklonierung bieten eine äußerst effiziente, 5-minütige Klonierungsstrategie in einem Schritt („TOPO™ Cloning“) für die direkte Einführung der Taq-Polymerase-amplifizierten PCR-Produkte in einen Plasmidvektor für die Subklonierung. Jedes Kit verwendet den pCR™ 2.1-TOPO™ TA-Vektor mit praktischen Restriktionsstellen für die Subklonierung. Die Klonierungs-Kits sind mit einer Vielzahl kompetenter Zellen oder auch ohne kompetente Zellen erhältlich und damit ganz an Ihre Anforderungen und Ihr Budget angepasst. Merkmale der TOPO™ TA Cloning™ Kits für die Subklonierung:

• Schnell und praktisch: Von der PCR zum Klon in nur drei Schritten und 5 Minuten
• Effizient: Bis zu 95 % der Klone mit dem korrekten Insert
• Bewährt: Zuverlässige Leistung seit über einem Jahrzehnt mit über 4.000 Referenzen
• Einfach: Keine Ligase, Post-PCR-Verfahren oder PCR-Primer, die bestimmte Sequenzen enthalten, erforderlich

TOPO™ TA Cloning™ Kits für die Subklonierung – Überblick

• Vektor: pCR™ 2.1-TOPO™ TA-Vektor: Subklonierungsvektor mit 15 praktischen Restriktionsstellen zu beiden Seiten Ihres Inserts gestatten ein einfaches, direktionales Subklonieren
• Klonierungsmethode: TOPO™ TA Cloning™: Ligation von PCR-Produkten auf Basis von Topoisomerase I in 5 Minuten mit 3′-A-Überhängen (Taq-Polymerase-amplifiziert) mit dem TOPO™-Vektor mit T-Überhängen
• Kompetente Zellen: Verschiedene Optionen: Wählen Sie entweder unter den Kits mit allgemeinen, hocheffizienten, bakteriophagen T1-beständigen, schnell wachsenden kompetenten Zellen, oder verwenden Sie Ihr eigenes

pCR™ 2.1-TOPO™ TA Vektor: Einfache Klonierung und Subklonierung
Der pCR™ 2.1-TOPO™ TA-Vektor ist mit 3'-Thymidin-(T)-Überhängen für die direkte Ligation der Taq-Polymerase-amplifizierten PCR-Produkte (TA Cloning™) linearisiert und mit kovalent gebundener Topoisomerase I „aktiviert“. Ligase muss nicht hinzugefügt werden und die Klonierung ist innerhalb von 5 Minuten abgeschlossen. EcoRI-Schnittstellen zu beiden Seiten der Einfügestelle des PCR-Produkts ermöglichen die problemlose Exzision von Inserts, oder verwenden Sie eine beliebige Kombination von 15 praktischen Restriktionsstellen, die Ihr PCR-Insert beiderseits einfassen und ein einfaches, direktionales Subklonieren ermöglichen.

pCR™ 2.1-TOPO™ TA-Klon-Selektion und -Manipulation
Der pCR™ 2.1-TOPO™ TA-Vektor enthält Ampicillin- und Kanamycin-Resistenzmarker und das LacZα-Gen für das Blau-Weiß-Screening.

Vereinfachtes TOPO™ -basiertes Klonen
Mit dem TOPO™ Verfahren sind für die Klonierung weder PCR-Primer mit bestimmten integrierten Sequenzen noch Post-PCR-Verfahren, Vektor-Vorbereitung oder andere zeitintensive Schritte zur DNA-Manipulation erforderlich. Geben Sie Ihre PCR-Reaktion einfach zum mitgelieferten Vektor mit gebundener Topoisomerase, warten Sie 5 Minuten, und führen Sie die Transformation in kompetente E. coli-Zellen durch.

Effiziente Klonierung
Mit bis zu 95 % der Klone, die das gewünschte Insert tragen, können Sie das Screening der Klone reduzieren, was Zeit und Geld spart. Der in diesem Kit verwendete pCR™ 2.1-TOPO™ TA-Vektor verfügt über 3'-T-Überhänge für eine effiziente Ligation von Taq-Polymerase-amplifizierten PCR-Produkten, die 3'-A Überhänge enthalten.

Der Standard für die Klonierung
Seit über 10 Jahren ist im Bereich der Klonierung das TOPO™ Verfahren für Tausende von Wissenschaftlern ein verlässlicher Partner. Die schnelle, einfache und effiziente TOPO™ Klonierung kam bereits bei einer Vielzahl von Vektoren und in unterschiedlichsten Anwendungen zum Einsatz.

TOPO™ TA Cloning™ Kits für die Subklonierung – Kit-Optionen
Das TOPO™ TA Cloning™ Kit für die Sequenzierung kann mit einer Vielzahl kompetenter Zellen erworben werden, die je nach Ihren Anforderungen unterschiedliche Vorteile bieten:

• Allgemeine Klonierung: Top10-Zellen (Kat.-Nr. K4500-01, K4500-40)
• Hocheffiziente Klonierung: TOP10 Electrocomp™ Zellen (Kat.-Nr. K4560-01, K4560-40)
• Klonierung allgemein, Resistenz gegen Bakteriophagen T1: DH5α-T1R-Zellen (Kat.-Nr. K4520-01, K4520-40)
• Schnelles Wachstum: Mach1™-T1R chemisch kompetente E. coli (Kat.-Nr. K4510-20)
• Stellen Sie Ihre eigenen Zellen bereit: Mehr Flexibilität und Kosteneffizienz (Kat.-Nr. 450641)

Wir bieten auch zwei Versionen des Kits mit PureLink™ Quick Plasmid-Miniprep-Kit (Kat.-Nr. Nr. K4500-02 und K4510-02), entwickelt zur Isolierung eines sauberen, sequenzierungsbereiten, rekombinanten Plasmids.