AmpErase™ Uracil N-Glycosylase (UNG), Bestandteil des GeneAmp™ PCR-Carry-over Prevention Kit, ist ein hochreines, rekombinantes Enzym mit einer Größe von 26 kDa. Es wird durch das E. coli Uracil N-Glycosylase-Gen, das in einen E. coli-Wirt eingebracht wurde, codiert, um die Expression der Wildtyp-Form des Enzyms zu steuern. Das Enzym entfernt alles Uracil aus einzel- oder doppelsträngiger DNA.

GeneAmp™ PCR-Kit zur Vermeidung von Verschleppungen
Das GeneAmp™ PCR-Kit zur Vermeidung von Verschleppungen (separat erhältlich) bietet Reagenzien für eine einfache und dennoch leistungsstarke Methode, die sicherstellt, dass PCR-Produkte bei nachfolgenden PCR-Amplifikationen nicht erneut amplifiziert werden können, und verhindert damit falsch-positive Ergebnisse. Merkmale dieses Kits:

• Die enzymatische Methode verhindert Kontaminationen durch Verschleppung von PCR-Produkten und vermeidet so falsch-positive Ergebnisse
• Zur Degradieren von PCR-Produkten aus vorherigen PCR-Amplifikationen ohne Degradation nativer Nukleinsäure-Templates, wodurch die Amplifikation verbessert wird
• Keine Interferenzen mit PCR- oder Real-Time PCR-Anwendungen
• Optimiert für die Verwendung mit GeneAmp™ PCR-Kernreagenzien und GeneAmp™ Gerätesystemen

Keine PCR-Verschleppungskontaminationen mehr
Das Kit verwendet eine enzymatische Reaktion analog dem Restriktionsmodifikations- und Exzisionsreparatursystem von Zellen, um PCR-Produkte aus vorherigen PCR-Amplifikationen, in die dUTP integriert wurde, gezielt zu degradieren, ohne die nativen Nukleinsäure-Templates zu beeinträchtigen. Damit PCR-Produkte abgebaut werden können, wird dTTP im PCR-Mix durch dUTP ersetzt, und alle nachfolgenden PCR-Mischungen werden vor der PCR-Amplifikation mit AmpErase™ Uracil N-Glycosylase (UNG) behandelt. Produkte aus der PCR-Amplifikation enthalten Uracil und sind leicht von nativen DNA-Templates mit Thymidin zu unterscheiden. Produkte aus früheren PCR-Amplifikationen werden beseitigt, indem Uracil-Reste mithilfe von UNG ausgeschnitten und die entstehenden abasischen Polynucleotide durch Erhitzen abgebaut werden. Obwohl UNG auf einzel- und doppelsträngiger dU-haltiger DNA reagiert, sind Ribouracil-Reste in RNA und dUTP selbst keine Substrate für UNG. AmpliTaq™ DNA-Polymerase, AmpliTaq Gold™ DNA-Polymerase und die übrigen Komponenten der PCR-Mischung bleiben während der UNG-Behandlung intakt, wodurch eine PCR-Amplifikation, frei von unerwünschten PCR-Produkten, erzielt werden kann. Das dU-haltige PCR-Produkt verhält sich wie dT-haltige-DNA im Blotting-Verfahren, bei der Klonierung, Sequenzierung und in den meisten anderen Analysen nach der PCR.