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AmpErase™ Uracil N-Glykosylase (UNG)

AmpErase™ Uracil N-Glycosylase (UNG), Bestandteil des GeneAmp™ PCR-Carry-over Prevention Kit, ist ein hochreines, rekombinantes Enzym mit einer Größe von 26Weitere Informationen

Katalognummer	Menge
N8080096	100 units

Katalognummer N8080096

Preis (EUR)

329,00

Menge:

100 units

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Preis (EUR)

329,00

AmpErase™ Uracil N-Glycosylase (UNG), Bestandteil des GeneAmp™ PCR-Carry-over Prevention Kit, ist ein hochreines, rekombinantes Enzym mit einer Größe von 26 kDa. Es wird durch das E. coli Uracil N-Glycosylase-Gen, das in einen E. coli-Wirt eingebracht wurde, codiert, um die Expression der Wildtyp-Form des Enzyms zu steuern. Das Enzym entfernt alles Uracil aus einzel- oder doppelsträngiger DNA.

GeneAmp™ PCR-Kit zur Vermeidung von Verschleppungen
Das GeneAmp™ PCR-Kit zur Vermeidung von Verschleppungen (separat erhältlich) bietet Reagenzien für eine einfache und dennoch leistungsstarke Methode, die sicherstellt, dass PCR-Produkte bei nachfolgenden PCR-Amplifikationen nicht erneut amplifiziert werden können, und verhindert damit falsch-positive Ergebnisse. Merkmale dieses Kits:

• Die enzymatische Methode verhindert Kontaminationen durch Verschleppung von PCR-Produkten und vermeidet so falsch-positive Ergebnisse
• Zur Degradieren von PCR-Produkten aus vorherigen PCR-Amplifikationen ohne Degradation nativer Nukleinsäure-Templates, wodurch die Amplifikation verbessert wird
• Keine Interferenzen mit PCR- oder Real-Time PCR-Anwendungen
• Optimiert für die Verwendung mit GeneAmp™ PCR-Kernreagenzien und GeneAmp™ Gerätesystemen

Keine PCR-Verschleppungskontaminationen mehr
Das Kit verwendet eine enzymatische Reaktion analog dem Restriktionsmodifikations- und Exzisionsreparatursystem von Zellen, um PCR-Produkte aus vorherigen PCR-Amplifikationen, in die dUTP integriert wurde, gezielt zu degradieren, ohne die nativen Nukleinsäure-Templates zu beeinträchtigen. Damit PCR-Produkte abgebaut werden können, wird dTTP im PCR-Mix durch dUTP ersetzt, und alle nachfolgenden PCR-Mischungen werden vor der PCR-Amplifikation mit AmpErase™ Uracil N-Glycosylase (UNG) behandelt. Produkte aus der PCR-Amplifikation enthalten Uracil und sind leicht von nativen DNA-Templates mit Thymidin zu unterscheiden. Produkte aus früheren PCR-Amplifikationen werden beseitigt, indem Uracil-Reste mithilfe von UNG ausgeschnitten und die entstehenden abasischen Polynucleotide durch Erhitzen abgebaut werden. Obwohl UNG auf einzel- und doppelsträngiger dU-haltiger DNA reagiert, sind Ribouracil-Reste in RNA und dUTP selbst keine Substrate für UNG. AmpliTaq™ DNA-Polymerase, AmpliTaq Gold™ DNA-Polymerase und die übrigen Komponenten der PCR-Mischung bleiben während der UNG-Behandlung intakt, wodurch eine PCR-Amplifikation, frei von unerwünschten PCR-Produkten, erzielt werden kann. Das dU-haltige PCR-Produkt verhält sich wie dT-haltige-DNA im Blotting-Verfahren, bei der Klonierung, Sequenzierung und in den meisten anderen Analysen nach der PCR.

Nur für Forschungszwecke. Nicht zur Verwendung bei diagnostischen Verfahren.

Specifications

PolymeraseDNA-Polymerase

ProduktlinieAmpErase

ProdukttypUracil N-Glykosylase für PCR-Reaktionen

Menge100 units

VersandbedingungTrockeneis

Ausreichend für100 PCR-Amplifikationen

Zur Verwendung mit (Anwendung)Standard-PCR

PCR-MethodeqPCR, Standard-PCR

Unit SizeEach

Inhalt und Lagerung

Enthält AmpErase™ Uracil-N-Glycosylase (UNG) (100 Einheiten). Ausreichend für 100 PCR-Amplifikationen mit je 100 µl. Bei -20°C lagern.

Häufig gestellte Fragen (FAQ)

What is AmpErase UNG, and how does it work?

AmpErase UNG (Uracil N-glycosylase) is an enzyme utilized in a powerful method for elimination of carryover PCR products in Real-Time PCR. This method modifies PCR products such that in a new reaction, any residual products from previous PCR amplifications will be digested and prevented from amplifying, but the true DNA templates will be unaffected.

Here is how it works: During amplification, dUTP is substituted for dTTP, resulting in dUTP-containing amplicons. In subsequent reactions, a short pre-PCR incubation step will allow the AmpErase UNG to digest any dUTP containing DNA. Since AmpErase UNG is active on both single- and double-stranded dUTP-containing DNA, the procedure should work on dU-containing PCR products from standard or asymmetric PCR amplifications. However, uracil ribonucleotide residues in RNA, novel DNA containing dTTP, or cDNA containing dTTP will not be suitable substrates for UNG, so your templates will be unaffected.

Note that this is a proactive method to prevent contamination from future reactions, but will not help with a pre-existing contamination problem of standard dTTP-containing PCR products. That can only be remedied with thorough cleaning of lab surfaces, equipment and air filters.

I am using AmpErase Uracil N-glycosylase (UNG) and dUTP in my PCR reactions and would like to use the PCR product in a post-PCR application. Does the dUTP affect my ability to hybridize, sequence, clone, or digest the PCR product?

PCR products containing dUTP residues are generally equivalent to dT-containing PCR products as hybridization targets and as templates for dideoxy-terminated sequencing reactions. They can also work equivalently as targets for direct cloning as long as they are transferred into UNG-minus bacterial hosts.

The recognition of dU-containing DNA by restriction endonucleases has been studied, and depending on the specific endonuclease there may be no effect on enzymatic activity on the substitution of dU for dT (e.g., EcoR1 and BamH1), or the dU-containing DNA is cleaved more slowly than dT-containing DNA (e.g., Hpa1, HindII, and HindIII). The most accurate answer on the effects of substituting dU for dT are best determined using your own empirical studies.