pHrodo™ Red and Green AM Intracellular pH Indicator Dyes

Measure and quantify intracellular pH with pHrodo Red and Green AM indicator dyes, which are fluorogenic probes that traverse the cell membrane and remain within the intracellular space upon cleavage by nonspecific esterases. pHrodo Red and Green AM indicator dyes become increasingly fluorescent as the pH drops and can be used to quantify cytosolic pH in the range of 4–9. These indicator dyes can also be used in multiplex experiments within HCS, flow cytometry, microplate fluorometry, and HCS applications.

pHrodo Red (Best.- Nr. P35372) und Grün (Bestell.-. Nr. P35373) AM intrazelluläre pH-Indikatoren sind fluorogene Sonden, die zur Messung des intrazellulären pH-Werts in lebenden Zellen verwendet werden. Die Sonden sind bei neutralem pH-Wert schwach fluoreszierend und fluoreszieren mit sinkendem pH-Wert immer stärker. Diese Reagenzien können zur Quantifizierung des pH-Werts zellulärer Zytosolen im Bereich von 4 – 9 mit einem pKa von ∼6,5 und mit Anregungs-/Emissionsspektren von 560/585 nm (pHrodo Red) oder 509/533 nm (pHrodo Green) verwendet werden.

Sowohl der pHrodo Red pH-Indikatorfarbstoff als auch der pHrodo Green pH-Indikatorfarbstoff ist photostabil und für Multiplex-Experimente geeignet. pHrodo Red kann problemlos mit einer Vielzahl von blauen, grünen und fern-roten Farbstoffen und Reportern wie GFP, Fuo-4, Calcein, NucBlue, CellEvent Caspase 3/7 Green, Mitosox Green und Mitotracker Deep Red überlagert werden. pHrodo Green kann problemlos mit einer Vielzahl von Reportern mit blauen, roten und weit roten Farbstoffen wie Mitosox Red, CellEvent Caspase 3/7 Red, NucBlue, RFPs und Mitotracker Deep Red überlagert werden.

Die Farbstoffe pHrodo Red und pHrodo Green wurden mit AM-Estergruppen modifiziert, was zu einem nicht geladenen, zellmembrangängigen Molekül führt. Nach Eindringen in die Zelle werden die lipophilen Blockierungsgruppen durch unspezifische Esterasen gespalten, was zu Verbindungen führt, die im intrazellulären Raum erhalten bleibt. Die Fluoreszenzintensität der Sonde ist dann ein Indikator für den intrazellulären pH-Wert. Die anschließende Verwendung des intrazellulären pH-Kalibrierpuffer-Kits (Best.- Nr. P35379) ermöglicht die Quantifizierung dieses intrazellulären pH-Werts.

pHrodo Red und Green AM intrazelluläre pH-Indikatoren sind mit verschiedenen Plattformen kompatibel, z. B. herkömmliche Fluoreszenzmikroskopie, High-Content-Screening (HCS), Durchflusszytometrie und mikrotiterplattenbasierte Fluorimetrie oder High-Throughput-Screening (HTS). Diese Reagenzien sind auch kompatibel mit Weitfeld- und Konfokal-Fluoreszenzmikroskopie, Durchflusszytometrie, Fluoreszenzplatten-Lesegeräten und High-Content-Instrumenten.