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Invitrogen™
Vybrant™ FLICA Caspase Apoptosis Assay Kits for flow cytometry
Nachweis von Apoptose durch Durchflusszytometrie mit Vybrant FLICA Caspase-Assays, die Poly- und Caspase-3/7/8-Aktivitäten nachweisen.
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| Katalognummer | Enzym |
|---|---|
| V35119 | Caspase 8 |
| V35117 | Poly Caspases |
| V35118 | Caspase 3/7 |
Katalognummer V35119
Preis (EUR)
544,00
25 assays
Enzym:
Caspase 8
Preis (EUR)
544,00
25 assays
Schneller Nachweis der von Caspase-vermittelten Apoptose durch Durchflusszytometrie mit Vybrant FAM Caspase-Assay-Kits für Polycaspasen und Caspasen-3 und -7. Vybrant FAM Caspase-Assay-Kits nutzen fluoreszierende Inhibitoren der Caspasen (FLICA)-Methodik zum Nachweisen und Melden von Caspase-Aktivität. Diese Caspase-Assay-Kits enthalten speziell entwickelte FLICA-Substrate FAM-VAD-FMK (für Polycaspasen), FAM-DEVD-FMK (für Caspase-3/7) und FAM-LETD-FMK (für Caspase-8). Sie umfassen auch Hoechst 33342 und Propidiumiodid-Färbemittel, was eine gleichzeitige Bewertung der Membrandurchlässigkeit und des Zellzyklus durch Durchflusszytometrie ermöglicht.
Vybrant FAM Caspase-Assay-Kits für die Durchflusszytometrie nutzen einen neuartigen Ansatz zur Erkennung aktiver Caspasen: die FLICA-Methodik, eine Affinitätsmarkierung. Diese Affinitätsmarkierung verbindet einen Fluoromethylketon (FMK)-Anteil, der kovalent mit einem Cystein reagieren kann, mit einer caspasespezifischen Aminosäuresequenz. Verschiedene Aminosäure-Erkennungssequenzen werden zum Nachweis verschiedener Caspasen verwendet: Valin-Alanin-Asparaginsäure (VAD) für Polycaspasen (einschließlich Caspase-1, -3, -4, -5, -6, -7, -8 und -9), Asparaginsäure-Glutaminsäure-Valin-Asparaginsäure (DEVD) für Caspase-3/7 und Leucin-Glutaminsäure-Threonin-Asparaginsäure (LETD) für Caspase-8. Eine Carboxyfluorescein-Gruppe (FAM) wird als Reporter angehängt.
Das FLICA-Reagenz soll über die Erkennungssequenz mit dem enzymatischen reaktiven Zentrum einer aktivierten Caspase interagieren und dann kovalent durch den FMK-Anteil anbinden. Der FLICA-Hemmer ist membrangängig und nicht-zytotoxisch. Ungebundene FLICA-Moleküle diffundieren aus der Zelle und werden weggespült; das verbleibende fluoreszierende Signal ist ein direktes Maß für die Menge an aktiver Caspase, die zum Zeitpunkt der Zugabe des Inhibitors vorhanden war. Die ungefähren Anregungs- und Emissionsspitzen der Reagenzien FLICA, Propidiumiodid und Hoechst 33342 betragen 488 nm⁄530 nm, 535 nm⁄617 nm bzw. 350 nm⁄461 nm. Die in den einzelnen Vybrant FAM Polycaspase-Assay-, Caspase-3 und -7 Assay- und Caspase-8 Assay-Apoptose-Kits enthaltenen Nachweisreagenzien sind 488⁄530 FAM-VAD-FMK- , 488⁄530 FAM-DEVD-FMK- bzw. 488⁄530 FAM-LETD-FMK-Reagenz.
Das FLICA-Reagenz soll über die Erkennungssequenz mit dem enzymatischen reaktiven Zentrum einer aktivierten Caspase interagieren und dann kovalent durch den FMK-Anteil anbinden. Der FLICA-Hemmer ist membrangängig und nicht-zytotoxisch. Ungebundene FLICA-Moleküle diffundieren aus der Zelle und werden weggespült; das verbleibende fluoreszierende Signal ist ein direktes Maß für die Menge an aktiver Caspase, die zum Zeitpunkt der Zugabe des Inhibitors vorhanden war. Die ungefähren Anregungs- und Emissionsspitzen der Reagenzien FLICA, Propidiumiodid und Hoechst 33342 betragen 488 nm⁄530 nm, 535 nm⁄617 nm bzw. 350 nm⁄461 nm. Die in den einzelnen Vybrant FAM Polycaspase-Assay-, Caspase-3 und -7 Assay- und Caspase-8 Assay-Apoptose-Kits enthaltenen Nachweisreagenzien sind 488⁄530 FAM-VAD-FMK- , 488⁄530 FAM-DEVD-FMK- bzw. 488⁄530 FAM-LETD-FMK-Reagenz.
Nur für Forschungszwecke. Nicht zur Verwendung bei diagnostischen Verfahren.
Specifications
EnzymCaspase 8
Anregung/EmissionFAM-LETD-FMDK: 488/530
PI: 535/617
Hoechst 33342: 350/461
PI: 535/617
Hoechst 33342: 350/461
Durchflusszytometer-LaserlinienUV, 488
Zur Verwendung mit (Geräte)Durchflusszytometer
Kitinhalt1 Fläschchen FAM-LETD-FMK Caspase-8-Reagenz (FLICA-Reagenz), 1 Fläschchen Hoechst 33342, 1 Fläschchen Propidiumiodid, 1 Fläschchen DMSO, 1 Flasche Apoptose-Fixierlösung und 1 Flasche Apoptose-Waschpuffer (10x Lösung).
MarkertypAndere Labels oder Farbstoffe
Marker oder FarbstoffFAM, Propidiumiodid, Hoechst 33342
ProduktlinieVybrant
ProdukttypCaspase-Assay-Kit
Menge25 Assays
VersandbedingungRaumtemperatur
LagerungsbedingungenIm Kühlschrank (2-8 °C) aufbewahren und vor Licht schützen.
NachweisverfahrenFluoreszenz
FormatRörchen
Unit Size25 assays
Inhalt und Lagerung
Vybrant FAM Caspase-8 Assay Kit
Zitierungen und Referenzen (13)
Zitierungen und Referenzen
Abstract
Galectin-3 binds to CD45 on diffuse large B-cell lymphoma cells to regulate susceptibility to cell death.
Journal:Blood
PubMed ID:23065155
Diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL) is the most common non-Hodgkin lymphoma and an aggressive malignancy. Galectin-3 (gal-3), the only antiapoptotic member of the galectin family, is overexpressed in DLBCL. While gal-3 can localize to intracellular sites, gal-3 is secreted by DLBCL cells and binds back to the cell surface in
Reovirus infection or ectopic expression of outer capsid protein micro1 induces apoptosis independently of the cellular proapoptotic proteins Bax and Bak.
Journal:J Virol
PubMed ID:20980509
Mammalian orthoreoviruses induce apoptosis in vivo and in vitro; however, the specific mechanism by which apoptosis is induced is not fully understood. Recent studies have indicated that the reovirus outer capsid protein µ1 is the primary determinant of reovirus-induced apoptosis. Ectopically expressed µ1 induces apoptosis and localizes to intracellular membranes.
Interrelated roles for Mcl-1 and BIM in regulation of TRAIL-mediated mitochondrial apoptosis.
Journal:J Biol Chem
PubMed ID:16478725
The current study demonstrates a novel cross-talk mechanism between the TRAIL receptor death signaling pathway and the mitochondria. This newly identified pathway is regulated at the mitochondrial outer membrane by a complex between the prosurvival Bcl-2 member, Mcl-1 and the BH3-only protein, Bim. Under non-apoptotic conditions, Bim is sequestered by
Assay of caspase activation in situ combined with probing plasma membrane integrity to detect three distinct stages of apoptosis.
Journal:J Immunol Methods
PubMed ID:12072182
Activation of cysteine-aspartic acid specific proteases (caspases) in situ, in live cells, can be detected using fluorochrome-labeled inhibitors of caspases (FLICA), the reagents that covalently bind to the active center of these enzymes. In the present study, this assay was combined with a probe of plasma membrane capacity to exclude
Interactions of fluorochrome-labeled caspase inhibitors with apoptotic cells: a caution in data interpretation.
Journal:Cytometry A
PubMed ID:12938188
BACKGROUND: Fluorochrome-labeled inhibitors of caspases (FLICA, e.g., FAM-VAD-FMK, FITC-VAD-FMK) have been designed as affinity labels of the enzyme active center of caspases Their binding by apoptotic cells was interpreted as reflecting activation of caspases. We have recently observed, however, that their binding is more complex and may involve additional mechanisms.