ZOOM™ Urea

Der ZOOM™ IEF Fraktionator bietet eine schnelle, zuverlässige Methode zur Reduzierung der Probenkomplexität, zur Anreicherung von Proteinen mit geringem Vorkommen und zur Erhöhung des dynamischen Nachweisbereichs. Die isoelektrische Fokussierung der Lösungsphase mit dem ZOOM™ IEF Fraktionator ermöglicht reproduzierbare Trennungen in drei Stunden. Die fraktionierten Proben sind bereit für die weitere Analyse mit zweidimensionaler Gelelektrophorese (2DE), eindimensionaler Gelelektrophorese (2DE) oder zweidimensionaler Flüssigkeitschromatographie/Massenspektrometrie (2D-LC/MS).

Das ZOOM™ IEF-Fraktionierer-System (Abb. 1) besteht aus folgenden Komponenten:

• Der ZOOM™ IEF-Fraktionierer ist auf Sicherheit, Zuverlässigkeit und Langlebigkeit ausgelegt. Im Lieferumfang sind einfach zusammensetzbare Probenkammern, integrierte Pufferkammern, Pufferwanne, abnehmbare Elektrodenbaugruppe und Sicherheitsdeckel enthalten.
• Zoom™ Scheiben sind Polyacrylamid-Fertiggele, die eine manuelle Vorbereitung überflüssig machen und die Gefahr einer Kreuzkontamination minimieren. Diese immobilisierten, gepufferten Einweg-Scheiben sind voretikettiert und für den einmaligen Gebrauch konzipiert, wodurch eine konsistente und reproduzierbare Fraktionierung gewährleistet wird. Sie lösen Proben in bis zu 7 Fraktionen (bei Verwendung von 8 Scheiben mit spezifischem pH-Wert) oder sechs Fraktionen (bei Verwendung von sechs Scheiben mit spezifischem pH-Wert) bei einem pH-Wert von 3 bis 12. Platzieren Sie einfach jede Scheibe zwischen die Probenkammern im ZOOM™ IEF Fraktionator, um eine Trennung in einem bestimmten pH-Bereich zu ermöglichen.
• ZOOM™ Reagenzien sind für die Proteomik geeignete Reagenzien, einschließlich ZOOM™ 2D-Protein-Lösungsmittel, Harnstoff, Thioharnstoff, CHAPS und Ampholyte, die für optimale Bedingungen bei der Probenvorbereitung sorgen.
• Basis-Protein-Kit, das ZOOM™ Scheiben und ZOOM Streifen für IEF von Basisproteinen, Fokussierungspuffer und Lösungsmittelkits enthält.

Einrichtung von Probenkammer und Fraktionierungseinheit
Die Abbildungen 4 bis 6 zeigen die Montage der Probenkammern und der Fraktionierungseinheit. Die Probenkammer und die Komponenten passen einfach zusammen und bieten eine auslaufsichere Abdichtung. Platzieren Sie einfach Scheiben zwischen den Probenkammern im ZOOM™ IEF Fraktionator, um eine Trennung in einem bestimmten pH-Bereich zu ermöglichen. Wenn Sie beispielsweise Proteine zwischen pH 4,6 und 5,4 fraktionieren möchten, begrenzen Sie eine Probenkammer mit einer ZOOM(r) Scheibe mit pH 4,6 und einer mit pH 5,4.

Downstream-Verarbeitung mittels 2D-Gelelektrophorese
Nach der Fraktionierung können die getrennten Proben mithilfe von ZOOM™ Streifen für einen engen oder weiten Bereich auf dem ZOOM™ IPGRunner™ System einer weiteren Analyse unterzogen werden. Führen Sie danach die Analyse in der zweiten Dimension mit für den neutralen pH-Bereich geeigneten NuPAGE™ ZOOM™ Gelen durch.