Pierce™ Classic Magnetic IP/Co-IP Kit

El kit IP/Co-IP magnético clásico Thermo Scientific Pierce permite una inmunoprecipitación (IP) y coinmunoprecipitación (co-IP) de antígenos y complejos proteicos altamente eficaces utilizando menos de 10 µg de anticuerpo y un separador magnético.

Características del kit IP/Co-IP magnético clásico:

• Compatible: los gránulos magnéticos basados en la proteína A/G recombinante garantizan la compatibilidad con la mayoría de los anticuerpos primarios, ya sean de ratón o de conejo
• Rápido: inmunoprecipitado en tan solo 30 minutos para reducir el fondo y mejorar la captura de complejos proteicos transitorios
• Limpio: inmovilice su anticuerpo para prevenir la contaminación de su eluido
• Resistente: sin lixiviación de la proteína A/G en presencia de detergentes, tampones de pH bajo o disolventes de espectrometría de masas comunes
• Eficaz: inmunoprecipitado con la mitad del volumen recomendado de partículas magnéticas en comparación con otros gránulos magnéticos
• Cómodo: el kit Co-IP completo contiene los gránulos magnéticos y todos los tampones esenciales para completar los experimentos de inmunoprecipitación

Este kit de inmunoprecipitación utiliza gránulos magnéticos de proteína A/G Pierce y tampones optimizados de alta calidad de Thermo Scientific, así como un protocolo flexible para lograr IP o co-IP de alta producción con herramientas de separación magnética manuales o automáticas. El tampón de lisis/lavado optimizado optimiza el rendimiento y la unión eficaz de las interacciones anticuerpo-antígeno y co-IP. El tampón de elución suave de bajo pH disocia el complejo inmune ligado de la proteína A/G. Como alternativa, el tampón de muestra de marcador de carril incluido ofrece una elución rápida y desnaturalizante para el análisis SDS-PAGE directo de productos IP.

Incluye:
Gránulos magnéticos de proteína A/G Pierce, tampón de lisis/lavado, tampón de elución, tampón de neutralización y tampón de carga de muestras

La inmunoprecipitación con partículas magnéticas se realiza de manera muy similar a la IP con agarosa granulada, excepto que las separaciones se realizan con un imán en lugar de por centrifugación. El anticuerpo específico primero se agrega a la muestra para formar un complejo inmune que luego se une a los gránulos magnéticos. El complejo se lava para eliminar el material no ligado y un tampón de elución de pH bajo disocia el complejo inmune ligado de la proteína A/G. Como alternativa, el tampón de muestra de marcador de carril incluido permite la disociación mediante condiciones de desnaturalización o para la preparación de muestras posteriores para el análisis SDS-PAGE. El kit incluye gránulos magnéticos de proteína A/G Pierce Thermo Scientific para un aislamiento magnético rápido y cómodo de antígenos y tampones optimizados para una alta producción de antígenos. Los gránulos se eliminan manualmente de la solución mediante un soporte magnético o mediante automatización con un instrumento, como el KingFisher Flex de Thermo Scientific.

Por lo general, se sabe que los tiempos de incubación de la muestra de anticuerpos más largos (dos horas hasta toda la noche) suelen proporcionar mayores producciones en los ensayos IP. A menudo se supone que esta mayor producción viene acompañada de un mayor fondo. Nuestros investigadores han constatado que la unión de anticuerpos-muestra durante la noche, seguida de la inmunoprecipitación con el kit de IP/Co-IP magnético Pierce Classic tiende a aumentar la producción pero no aumenta el fondo. Por lo tanto, recomendamos que los investigadores realicen este paso de unión durante al menos una hora siempre que sea posible.

Resumen del protocolo:
•Incube el lisado celular con el anticuerpo IP elegido entre una y dos horas a temperatura ambiente o durante la noche a 4 ºC.
• Una el complejo de antígeno/anticuerpo a los gránulos magnéticos de proteína A/G durante una hora a temperatura ambiente.
• Lave los gránulos dos veces con tampón de lisis/lavado IP y una vez con agua purificada.
• Eluya el complejo antígeno/anticuerpo.

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