Système de synthèse premier brin SuperScript™ IV

Le système de synthèse premier brin SuperScript™ IV pour la RT-PCR est optimisé pour synthétiser l’ADNc premier brin à partir de poly(A)+ purifié ou d’ARN total. Le kit contient la transcriptase inverse (RT) SuperScript™ IV, un mutant exclusif du M-MLV qui produit une synthèse robuste et fiable d’ADNc dans les réactions RT. Le système de synthèse SuperScript™ IV a été sensiblement amélioré par rapport au système SuperScript™ III en termes de résistance aux inhibiteurs, de processivité et de vitesse de réaction, tout en conservant tous les avantages du système précédent, notamment une thermostabilité supérieure, une synthèse d’ADNc pleine longueur très efficace et une activité ARNase réduite. Le système SuperScript™ IV est conçu pour fournir une synthèse fiable, cohérente et rapide de l’ADNc en présence d’inhibiteurs trouvés dans une grande variété d’échantillons qui font que d’autres RT actuellement disponibles ne fonctionnent pas efficacement.

Le système de synthèse premier brin SuperScript™ IV contient tous les composants nécessaires aux réactions RT, ainsi qu’un gène de contrôle supplémentaire et des amorces. Il offre la flexibilité nécessaire pour personnaliser la configuration RT et répondre aux besoins de votre application. Le système de synthèse SuperScript™ IV est le choix idéal pour assurer une performance et une flexibilité exceptionnelles pour les applications RT-PCR. Nous le recommandons pour toutes les applications RT-PCR, tout particulièrement lorsque la reproductibilité et la fiabilité sont des préoccupations majeures et lorsque les inhibiteurs de l’échantillon d’ARN risquent d’interférer avec la synthèse d’ADNc, conduisant à des résultats biaisés dans les études d’expression génétique.

Les caractéristiques du système de synthèse premier brin SuperScript™ IV comprennent :
• Résistance grandement améliorée à une variété d’inhibiteurs pouvant interférer avec la synthèse d’ADNc
• Synthèse robuste et spécifique de l’ADNc dans une large gamme de types d’échantillons
• Réaction de transcriptase inverse plus rapide qui réduit le temps d’incubation de >50 min à 10 min
• Une processivité nettement meilleure par rapport à la

source d’enzymes RT SuperScript™ III
Purifié à partir d’E. coli exprimant le gène pol du M-MLV, modifié pour augmenter la thermostabilité et la demi-vie, la processivité, la résistance aux inhibiteurs et pour réduire l’activité de la RNase H.

Tests de performance et de qualité
Dosages d’endodésoxyribonucléase, d’exodésoxyribonucléase et de ribonucléase ; rendement et longueur du produit d’ADNc.

Définition de l’unité
Une unité de RT SuperScript™ IV est la quantité d’enzymes nécessaire pour incorporer 1 nmol de désoxyribonucléotide dans un matériau précipitable à l’acide en 10 min à 37°C en utilisant le poly(A) oligo(dT)_12-18 comme modèle / amorce.

Conditions de réaction de l’unité
50 mM de Tris-HCl (pH 8,3), 4 mM de MgCl², 10 mM de DTT, 50 mM de KCl, 0,5 mM de dTTP, 0,4 MBq / ml [³H]-dTTP, 0,4 mM de poly(A) oligo (dT)_12-18 et enzyme dans 20 μl pendant 10 min à 37°C.