Pierce™ Monomeric Avidin Agarose Kit, 2 mL

Le kit d’avidine monomérique Thermo Scientific Pierce permet une purification par affinité douce et non dénaturante des molécules biotinylées.

Caractéristiques du Kit d’avidine monomérique :

• Kit pratique : kit de purification complet avec colonne et tampons préemballés
• Non-dénaturant : purifie les produits biotinylés en utilisant des conditions d’élution douce (2 mM de biotine libre)
• Réutilisable : l’agarose d’avidine monomère peut être régénéré et réutilisé au moins 10 fois, avec seulement une perte marginale de la capacité de liaison de la biotine (environ 2,5 % de diminution par régénération)
• Spécifique : conserve une spécificité de liaison à la biotine et une faible liaison non spécifique de l’avidine native
• Flexible : lie les échantillons dans une variété de tampons physiologiques et élue soit avec 0,1 M de glycine, soit par compétition avec 2 mM de biotine
• Bonne capacité de liaison : supérieure à 1,2 mg de BSA biotinylé / ml de résine

La protéine d’avidine monomère immobilisée se lie à la biotine avec une grande spécificité et une affinité modérée, permettant aux molécules non-biotines d’être lavées et ensuite aux molécules liées marquées à la biotine d’être éluées de manière compétitive en utilisant 2 mM de biotine dans une solution saline tamponnée au phosphate (PBS). Cette technique fournit les conditions d’élution les plus douces pour la purification des protéines biotinylées et évite la contamination et d’autres problèmes associés aux méthodes traditionnelles basées sur l’avidine et la streptavidine. La colonne d’avidine monomère peut ensuite être régénérée en utilisant 0,1 M de glycine pour débarrasser la colonne de la biotine résiduelle liée sans perdre la capacité de lier un autre échantillon biotinylé.

Avec l’avidine ou la streptavidine typiques, l’affinité de liaison à la biotine (Kd = 10^-15 M) est si grande que la purification avec ces milieux traditionnels nécessite des conditions dénaturantes pour l’élution, comme 8 M de chlorhydrate de guanidine à pH 1,5 ou l’ébullition dans un tampon de chargement d’échantillon SDS-PAGE réducteur. En plus de leurs effets néfastes sur la protéine biotinylée d’intérêt, ces conditions d’élution sévères amènent en général des protéines étrangères (c.-à-d. les sous-unités avidine ou streptavidine) à se détacher de la résine et à produire une co-élution avec le produit de purification souhaité. En revanche, lorsque l’avidine est couplée à une résine (par exemple, les billes d’agarose réticulé ou la résine UltraLink) comme sous-unité monomère, sa spécificité pour la biotine est préservée mais son affinité de liaison à la biotine diminue jusqu’à un niveau (Kd = 10^-8 M) qui favorise une élution ultérieure.

Produits associés
Agarose d’avidine monomérique Pierce™
Résine d’avidine monomérique Pierce™ UltraLink™