Le réactif A du dosage protéique BCA est un composant du kit de dosage protéique Pierce BCA, un ensemble de réactifs de dosage de haute précision, à deux composants, compatible avec les détergents, qui est utilisé pour déterminer la concentration protéique totale par rapport à une norme protéique. Les réactifs BCA Pierce permettent une détermination précise de la concentration des protéines avec la plupart des types d’échantillons rencontrés dans la recherche sur les protéines. Le dosage BCA Pierce peut être utilisé pour évaluer les rendements des lysats de cellules entières, des fractions de colonnes d’affinité, des échantillons de protéines purifiées, ainsi que pour surveiller la contamination des protéines dans les applications industrielles. Par rapport à la plupart des méthodes de liaison des colorants, le dosage BCA est beaucoup moins affecté par les différences de composition des protéines, ce qui permet une plus grande précision de la concentration.

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Caractéristiques du kit de dosage protéique Pierce BCA (réactifs A et B) :
• Colorimétrique—évaluez visuellement ou mesurez à l’aide d’un spectrophotomètre standard ou d’un lecteur de plaques à 562 nm
• Uniformité—montre moins de variations protéine-à-protéine que les méthodes de liaison aux colorants (Bradford)
• Compatibilité—non affectée par les concentrations typiques de la plupart des détergents ioniques et non ioniques
• Durée du dosage—30 min d’incubation ; beaucoup plus simple et quatre fois plus rapide que la méthode Lowry classique
• Plage de dosage—la plage de fonctionnement linéaire du BSA est comprise entre 20 et 2 000 µg/ml
• Sensibilité—détecte des concentrations aussi basses que 5 µg/ml grâce au protocole optimisé

Fonctionnement du dosage
Le dosage protéique BCA combine la réduction bien connue du Cu²⁺ en Cu¹⁺ au moyen de protéines dans un milieu de culture alcalin à l’aide de la détection colorimétrique hautement sensible et sélective de l’ion métallique cuivreux (Cu¹⁺) par l’acide bicinchoninique (BCA). La première étape est la chélation du cuivre à l’aide de protéines dans un environnement alcalin pour former un complexe bleu clair. Dans cette réaction, connue sous le nom de réaction du biuret, les peptides contenant trois acides aminés résiduels ou plus forment un complexe chélateur coloré avec les ions cuivreux dans un environnement alcalin contenant du tartrate de sodium et de potassium.

Dans la deuxième étape de la réaction de développement de la couleur, la BCA réagit avec le cation réduit (cuivré) qui s’est formé lors de la première étape. Le produit de la réaction d’une couleur pourpre intense est le résultat de la chélation de deux molécules de BCA et d’un ion cuivreux. Le complexe BCA / cuivre est hydrosoluble et montre une forte absorbance linéaire à 562 nm avec des concentrations croissantes en protéines. Le complexe est environ 100 fois plus sensible (limite basse de détection) que la couleur bleu pâle de la première réaction.

La réaction est fortement influencée par quatre acides aminés résiduels (cystéine ou cystine, tyrosine et tryptophane) dans le séquençage amino-acide de la protéine. Toutefois, contrairement aux méthodes de liaison aux colorants Coomassie, la structure universelle des peptides contribue également à la formation de la couleur, ce qui aide à minimiser la variabilité due aux différences de composition des protéines.

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