Pierce™ Fluorescent Protease Assay Kit

Le kit de dosage des protéases par fluorescence Thermo Scientific Pierce mesure l’activité totale des protéases dans les échantillons, fournissant un moyen d’évaluer le progrès des procédures d’isolation de la protéase ou de quantifier la contamination de la protéase dans les échantillons biologiques.

Ce kit comprend de la caséine marquée à la fluorescéine comme substrat pour évaluer l’activité de la protéase dans un échantillon, soit par transfert d’énergie de résonance de fluorescence (FRET) avec un fluorimètre étalon, soit par polarisation de fluorescence (FP) avec une instrumentation adaptée. La caséine-FITC est une caséine native qui a été marquée en utilisant un large excès molaire d’isothiocyanate de fluorescéine (FITC). Les propriétés de fluorescence de ce substrat protéique intact fortement marqué sont considérablement modifiées suite à une digestion par des protéases, ce qui offre une indication mesurable de la protéolyse.

Caractéristiques du Kit de dosage des protéases par fluorescence :

• Substrat de caséine : mesure l’activité de toute protéase qui clive la caséine en fragments de peptides
• Étalon de trypsine : quantifie l’activité de la protéase par rapport à la trypsine, une référence universellement acceptée
• Sensible : 1 000 fois plus sensible que les dosages qui utilisent des formes de caséine non modifiées
• Simple et rapide : les protocoles en tube à essai ou sur microplaque sont réalisés en moins d’une heure
• Homogène : étapes d’ajout homogènes uniquement ; aucune étape de séparation, de transfert ou d’arrêt n’est requise
• Personnalisable : la durée, la température et le pH peuvent être facilement adaptés afin d’optimiser la sensibilité exigée par des protéases d’intérêt

Applications :
• Évaluation de l’intégrité fonctionnelle et de l’évolution globale de la purification des protéases
• Quantification de la contamination d’échantillons protéiques par les protéases
• Caractérisation de l’activité de protéases inhabituelles par comparaison à la trypsine
• Évaluation des conditions tampon pour identifier leurs effets sur la fonction et l’activité des protéases

Spécifications supplémentaires :
• Substrat : caséine marquée à la fluorescéine (caséine FITC) ; disponible séparément réf. n°23267
• Base du dosage : modification de la fluorescence par résonance (FRET) ou de la polarisation de fluorescence (FP)
• Mesure : instrument équipé de filtres d’excitation et d’émission de la fluorescéine (485 / 538 nm)

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