Pierce™ Agarose ChIP Kit
Thermo Scientific™

Pierce™ Agarose ChIP Kit

Le kit de ChIP sur agarose Thermo Scientific Pierce contient un ensemble complet de réactifs et offre un protocole simple,Afficher plus
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RéférenceQuantité
26156Kit de 30 réactions
Référence 26156
Prix (EUR)
834,00
Each
Quantité:
Kit de 30 réactions
Grand volume ou format personnalisé
Prix (EUR)
834,00
Each
Le kit de ChIP sur agarose Thermo Scientific Pierce contient un ensemble complet de réactifs et offre un protocole simple, rapide et reproductible pour réaliser des dosages par immunoprécipitation de la chromatine (ChIP).

Caractéristiques du kit de ChIP sur agarose :

• Protocole de dosage ChIP simple et rapide (< 8 heures)
• Isolement et lyse des noyaux avec une grande efficacité
• Digestion enzymatique simple et reproductible
• Faible bruit de fond et résine d’agarose-protéine A / G à haute capacité
• Contrôles positifs hautement spécifiques inclus : Anticorps anti-ARN polymérase II et amorces de PCR GAPDH
• Format de colonne de centrifugation rapide et reproductible
• Purification de l’ADN avec un taux de récupération élevé
• Anticorps validés par ChIP disponibles

Le kit de ChIP sur agarose Pierce contient suffisamment de réactifs pour réaliser 30 dosages par ChIP avec des contrôles appropriés, utilise un protocole optimisé et un format pratique de colonne de centrifugation. Des anticorps validés pour la ChIP et de qualité garantie utilisables avec le kit de ChIP sur agarose Pierce sont également disponibles. Parce que les anticorps qui fonctionnent pour le transfert Western peuvent ne pas fonctionner dans les dosages ChIP, nous avons assemblé ici nos anticorps monoclonaux et polyclonaux validés par ChIP les plus populaires pour vous aider à passer plus rapidement de la configuration expérimentale aux résultats.

La puissance du dosage par ChIP repose sur son aptitude à prendre un cliché des interactions protéine-ADN spécifiques au moment exact où elles se produisent dans les cellules vivantes, puis à quantifier les interactions à l’aide d’une PCR standard ou quantitative. Le succès des dosages par ChIP exige un certain nombre d’étapes (réticulation, préparation de la chromatine, immunoprécipitation) avant de détecter la séquence d’ADN génomique cible. L’optimisation de chacune des étapes du protocole de dosage par ChIP peut prendre un temps considérable. Le kit de dosage par ChIP sur agarose Pierce simplifie ce processus, en facilitant l’obtention de résultats précis et reproductibles.

Avant de réaliser les dosages par ChIP avec le kit de ChIP sur agarose Pierce, les complexes protéine-ADN sont stabilisés puis extraits. La réticulation in vivo est traditionnellement réalisée avec le formaldéhyde. La réticulation réalisée directement dans les cellules verrouille les complexes protéine-ADN, en piégeant ces interactions instables et parfois transitoires. Pour lyser, extraire et solubiliser les complexes réticulés, le kit de dosage par ChIP comprend le module de préparation de la chromatine Thermo Scientific (également vendu séparément sous le N° Réf. 26158). Ensemble, ce kit de dosage ChIP complet offre un moyen simple, fiable et pratique d’isoler l’ADN lié à la chromatine et d’enrichir les échantillons pour les protéines d’intérêt avec moins de 15 % de contamination provenant d’autres compartiments cellulaires, sans homogénéiseur de rebond.

Produits associés
Module de préparation de la chromatine Pierce™
Agarose Plus de protéine A / G de qualité ChIP Pierce™
Protéinase K
Usage exclusivement réservé à la recherche. Ne pas utiliser pour des procédures de diagnostic.
Spécifications
Capacité de liaisonCapacité de liaison en résine de >50 mg d’IgG humaine/ml
DescriptionKit de ChIP sur agarose Pierce
FormatKit
QuantitéKit de 30 réactions
Suffisant pour30 réactions
Capacité (métrique)≥50 mg d’IgG humaine par ml de liaison en résine
Gamme de produitsPierce
TypeKit de ChIP sur agarose
Unit SizeEach
Contenu et stockage
Suffisant pour : 30 expériences complètes de dosage IP de la chromatine• Agarose Plus de protéine A / G de qualité ChIP, 0,65 ml (conserver à 4°C)
• Tampon de dilution / lavage IP (5X), 11 ml (conserver à 4°C)
• Tampon de lavage IP 3 (5X), 4,5 ml (stockage à 4°C)
• Tampon d’élution IP (2X), 4,5 ml (stockage à 4°C)
• Boîte d’accessoires pour colonne, 3 boîtes (à conserver à température ambiante ou à 4°C)
• Microtubes à centrifuger (1,5 ml), 75 tubes (à conserver à température ambiante ou 4°C)
• Colonne de nettoyage de l’ADN, 40 colonnes (à conserver à température ambiante ou à 4°C)
• Solution de liaison de colonne ADN, 30 ml (à conserver à température ambiante ou à 4°C)
• Solution de lavage de colonne ADN, 6 ml (stocker à température ambiante ou à 4°C)
• Indicateur de pH, 0,8 ml (stocker à température ambiante ou à 4°C)
• Solution d’élution pour colonne ADN, 5 ml (à conserver à température ambiante ou à 4°C)
• Anticorps anti-ARN polymérase II, 25 µml (à conserver à -20°C)
• IgG de lapin normale (1 mg / ml), 10 µl (à conserver à -20°C)
• Amorces de contrôle positif pour ChIP (promoteur GAPDH, spécifique à l’homme), 100 µl (conserver à -20°C)
• Module de préparation de la chromatine Pierce (réf. 26158) (conserver la protéinase K et la nucléase micrococcale à -20°C. Conservez tous les autres composants à 4°C).

Foire aux questions (FAQ)

I am having trouble with leaking columns while using the Pierce Agarose ChIP Kit (Cat. No. 26156). How can I resolve this issue?

It is common to experience leaking when using the columns, even when the plug is pushed in very tightly. We recommend wrapping the plug with parafilm to prevent leaking.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Protein Assays and Analysis Support Center.

With my ChIP assay (Agarose ChIP Kit/Magnetic ChIP Kit), the qPCR signal (cycle threshold) from my positive and negative controls show no difference or are very close. Why is this?

-Verify that your specific antibody (if not using the kit-provided RNA polymerase II antibody) is validated for IP. Ideally, a ChIP validated antibody is the best, but an antibody for IP has a good chance of working in ChIP.
-Ensure that your chromatin is properly digested (see Appendix A in the manual). Too much digestion as well as too little digestion will affect the success of the ChIP reaction.
-Ensure that all the chromatin has been released from the nuclei. When following the Magnetic ChIP kit instructions, MNase digestion of 4x106 cells followed by sonication to lyse the nuclei, yields about 20-50 µg for the IP. This same sequence can be used with the Agarose ChIP Kit as well. It is recommended that you start with 2–4 x 106 cells per ChIP reaction. Once a successful ChIP has been run at this cell number, it is possible to decrease the cell amount empirically. We have seen good results using as little at 10,000 cells, but this entirely depends on the cell line, target, and antibody.
-Ensure that enough DNA was used for qPCR. Typically, 30-80 ng of DNA is a good range.

With my Agarose ChIP Kit, what can cause no or low PCR signal in the experimental IP samples?

Here are possible causes and solutions:

- Insufficient amount of sample DNA added to the PCR reaction: Add more sample DNA to the PCR reaction.
- Insufficient amount of antibody added to the IP: Add more antibody to the IP.
- Antibody did not function in an IP: Verify that the antibody is qualified for CHIP or IP applications and has been handled and stored properly.

Note: Increasing the stringency of the nuclear lysis is not recommended unless there is no signal or low signal-to-noise in the IP. Excess sample can result in high background decreasing the signal of the specific signal.

With my Agarose ChIP Kit, what can cause PCR signal of the positive and negative control IP samples to be equivalent?

Here are possible causes and solutions:

- Insufficient washing of the IP complex: Include an additional wash with Buffers 2 and 3.
- Excess chromatin or antibody added to the IP: Add less chromatin or antibody.
- PCR amplification was measured outside the linear range of amplification: Decrease the number of amplification cycles used in the PCR reaction.

With my Agarose ChIP Kit, what can cause no or low PCR signal in the positive control IP samples?

Here are possible causes and solutions:

- Insufficient chromatin amount in the IP reaction: Use at least 25 µg of chromatin for each IP.
- Insufficient antibody incubation time: Incubate antibody overnight.
- Incomplete elution from the Protein A/G agarose resin: Perform elution at 65 degrees C and increase frequency of mixing.