Pierce™ Magnetic ChIP Kit

Le kit de ChIP magnétique Pierce Thermo Scientific fournit une méthode pratique pour isoler efficacement l’ADN lié à la chromatine par immunoprécipitation (IP de la chromatine) en vue de l’analyse quantitative ultérieure par PCR.

Caractéristiques du kit de ChIP magnétique :

• Rapide : obtention d’ADN purifié prêt pour la PCR quantitative en environ 8 heures
• Efficace et reproductible : digestion à la nucléase micrococcale et lyse nucléaire hautement optimisées
• Sensible : obtention de résultats avec seulement 10 000 cellules (1 x 10^4)
• Faible bruit de fond : microbilles magnétiques de protéine A / G bloquées dans un réactif exempt de toute trace d’ADN pour réduire le bruit de fond au minimum
• Complet : réactifs de contrôle positif optimisés inclus : anticorps anti-ARN polymérase II et amorces pour PCR pour le promoteur GAPDH

Le kit de ChIP magnétique Pierce contient suffisamment de réactifs pour réaliser 30 dosages par immunoprécipitations de la chromatine (ChIP) avec les contrôles adéquats à l’aide d’un protocole optimisé. Le kit comprend des réactifs pour réaliser la lyse des cellules, la capture des complexes protéine-ADN, la déréticulation et l’isolement de l’ADN. Les microbilles magnétiques-protéine A / G bloquées de Pierce sont caractérisées par une forte capacité de liaison et un faible bruit de fond non spécifique. De plus, elles fonctionnent avec des anticorps issus d’un grand nombre d’espèces. Ces microbilles peuvent être utilisées manuellement avec un support magnétique ou bien avec une plateforme automatique telle qu’un appareil Thermo Scientific KingFisher. Des anticorps validés pour la ChIP et de qualité garantie sont également disponibles pour une utilisation avec le kit de ChIP magnétique Pierce.

Comprend :
Le kit contient des réactifs pour la préparation de la chromatine, l’immunoprécipitation, la purification de l’ADN et des contrôles positifs (anticorps et amorces).

Nécessite :
Agent de réticulation in vivo (comme le formaldéhyde), sonicateur à micro pointe (comme le sonicateur Misonix™ 3000), anticorps de spécificité souhaitée compatible avec la ChIP, amorces pour PCR pour la séquence d’ADN étudiée, Master Mix pour PCR (contenant un colorant tel le SYBR™ Green, en cas de qPCR) et un instrument de qPCR

Applications :
• Déterminer les sites d’interactions protéine-ADN spécifiques sur l’ADN génomique par PCR ou ChIP-Seq
• Surveiller les effets des modifications des histones ou des agents chimiques sur la liaison à l’ADN

Le succès des dosages par ChIP exige un certain nombre d’étapes cruciales (réticulation, préparation de la chromatine, immunoprécipitation) avant de détecter l’ADN génomique cible. L’optimisation de chacune de ces étapes peut prendre un temps considérable. Le kit de ChIP magnétique Pierce Thermo Scientific simplifie le processus ChIP pour permettre l’obtention de résultats précis et reproductibles.

Les complexes protéine-ADN sont tout d’abord réticulés in vivo dans le formaldéhyde. Le kit contient les réactifs nécessaires pour la lyse des cellules et l’extraction et la solubilisation des complexes réticulés. Les complexes sont ensuite incubés avec un anticorps spécifique puis isolés à l’aide des microbilles magnétiques protéine A/G Pierce. Après la déréticulation et la digestion des protéines, les fragments d’ADN obtenus sont purifiés pour pouvoir être analysés par PCR standard ou quantitative.

Plus de données sur le produit
• Analyse de la régulation indépendante et dépendante de l’androgène de l’activité transcriptionnelle

Produits associés
Kit de ChIP magnétique Pierce™
Microbilles magnétiques de protéine A / G de qualité ChIP Pierce™