Kit d’analyse quantitative de la biotine par fluorescence Pierce™

Le kit de quantification de la biotine par fluorescence Thermo Scientific Pierce ne nécessite que dix microlitres d’échantillon pour mesurer avec précision le niveau de biotinylation des anticorps marqués et d’autres biomolécules.

Caractéristiques du kit de quantification de la biotine par fluorescence :

• Rapide : ne nécessite qu’une incubation de 5 minutes
• Économique : ne nécessite que 10 µl d’échantillon (environ 750 ng d’IgG biotinylée)
• Sensible :plage de fonctionnement linéaire de 10 à 60 picomoles de biotine

Ce dosage de biotine basé sur microplaques est facile à exécuter en ajoutant le rapporteur fluorescent fourni aux échantillons biotinylés et aux étalons de biocytine dilués. L’avidine produit une fluorescence lorsque l’HABA à interactions faibles (acide 4’-hydroxyazobenzène-2-carboxylique) est déplacé par la biotine. La quantité de biotine est déterminée en comparant la fluorescence de l’échantillon à la courbe étalon de biocytine. Ce dosage nécessite moins de volume d’échantillon que le dosage HABA colorimétrique sur microplaques et est beaucoup plus sensible.

Comprend
un tampon de dosage, une solution de rapporteur fluorescent HABA-avidine et un contrôle de biocytine

Nécessite
une microplaque noire opaque à 96 puits et un lecteur de plaque par fluorescence (excitation à 494 nm ; émission à 520 nm)

L’interaction hautement spécifique de l’avidine ou de la streptavidine avec la biotine constitue la base de nombreux systèmes de purification et de détection. Il est nécessaire de quantifier le degré de biotinylation pour évaluer si la procédure d’étiquetage de la biotine est réussie et quelle quantité de molécule biotinylée doit être utilisée pour une application spécifique.

L’HABA (acide 4’-hydroxyazobenzène-2-carboxylique) est un colorant qui interagit faiblement avec l’avidine et qui est couramment utilisé dans un dosage colorimétrique pour estimer rapidement le rapport biotine-protéine. Le kit de quantification de la biotine par fluorescence utilise également du colorant HABA, mais il est plus sensible et précis. Un prémélange d’avidine fluorescente avec HABA (DyLight Reporter) est ajouté à la solution contenant l’échantillon biotinylé. En raison de sa plus grande affinité pour l’avidine, la biotine déplace le HABA, permettant ainsi à l’avidine de produire une fluorescence. La quantité de biotine est mesurée sur une microplaque en comparant la fluorescence à une courbe étalon de biocytine.

Le kit de dosage de la biotine par fluorescence ne nécessite que 10 µl d’échantillon. Par comparaison, la méthode colorimétrique traditionnelle nécessite 100 µl d’échantillon et un autre kit de dosage par fluorescence de premier plan nécessite 50 µl d’échantillon. Notre kit est plus précis que le dosage de biotine par fluorescence d’un autre fournisseur (Marque I).