Le kit de fractionnement subcellulaire de protéines Thermo Scientific pour cellules cultivées permet la ségrégation et l’enrichissement des protéines à partir de cinq compartiments cellulaires différents.
Caractéristiques du kit de fractionnement subcellulaire de protéines pour cellules cultivées :
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Concis : permet d’extraire des fractions protéiques cytoplasmiques fonctionnelles, membranaires, nucléaires et solubles, liées à la chromatine et cytosquelettiques à partir de cellules de mammifères mises en culture en moins de 3 heures
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Pratique : permet de suivre une procédure simple sans utiliser l’ultracentrifugation sur les gradients
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Complet : permet d’obtenir des fractions protéiques cytoplasmiques, membranaires, nucléaires et solubles, liées à la chromatine et cytosquelettiques à partir d’un seul kit
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Cellules mises en culture : élaboré et optimisé avec des cellules de mammifères mises en culture ; pour les échantillons de tissu, utilisez le
kit de fractionnement subcellulaire de protéines pour les tissus•
Compatible : utilisé avec une diversité d’applications en aval, notamment le dosage des protéines, le transfert Western, les analyses protéiques, les analyses de mobilité électrophorétique et les analyses de gènes rapporteurs et d’activité enzymatique.
Applications pour le fractionnement subcellulaire :• Extraction et enrichissement des protéines de différents compartiments cellulaires
• Isolement des protéines cytoplasmiques, nucléaires, membranaires et cytosquelettiques à partir des mêmes cellules
• Profilage des cellules pour les protéines du cytoplasme, du noyau, de la membrane et du cytosquelette
• Étude de la translocation des protéines
Le fractionnement subcellulaire de protéines permet d’évaluer la localisation des protéines et l’enrichissement des protéines à partir de compartiments cellulaires spécifiques. Le kit de fractionnement subcellulaire des protéines Thermo Scientific comprend plusieurs réactifs pour la lyse progressive des cellules dans des fractions protéiques cytoplasmiques fonctionnelles, membranaires, nucléaires et solubles, liées à la chromatine et cytosquelettiques en moins de 3 heures. Les extraits de chaque compartiment subcellulaire présentent généralement moins de 15 % de contamination entre les fractions, ce qui est une pureté suffisante pour la plupart des expériences qui étudient la localisation et la redistribution des protéines.
Le kit de fractionnement subcellulaire des protéines pour cellules cultivées contient quatre tampons d’extraction, une nucléase stabilisée et un cocktail inhibiteur de protéase Halt Thermo Scientific. Chaque kit compte suffisamment de réactifs pour fractionner 50 culots de cellules de 20 µl chacun, à savoir l’équivalent d’environ 2 g de pâte cellulaire. (Pour les échantillons de tissus, utilisez notre
kit de fractionnement subcellulaire des protéines pour les tissus.)
Le premier réactif du kit, lorsqu’il est ajouté à un culot cellulaire, provoque une perméabilisation sélective de la membrane, libérant ainsi des contenus cytoplasmiques solubles. Le deuxième réactif dissout le plasma, la mitochondrie et les membranes ER-golgi mais ne solubilise pas les membranes nucléaires. Après la récupération du noyau intact par centrifugation, un troisième réactif produit l’extrait nucléaire soluble. Une extraction nucléaire supplémentaire avec la nucléase micrococcale est réalisée pour relâcher les nucléoprotéines liées à la chromatine. Le culot insoluble récupéré est ensuite extrait avec le réactif final pour isoler les protéines cytosquelettiques.
Produits associésKit de fractionnement de protéines infracellulaires pour tissusCentrifugeuses de paillasseUsage exclusivement réservé à la recherche. Ne pas utiliser pour des procédures de diagnostic.