Kit de fractionnement des protéines infracellulaires pour les cellules mises en culture
Thermo Scientific™

Kit de fractionnement des protéines infracellulaires pour les cellules mises en culture

Le kit de fractionnement subcellulaire de protéines Thermo Scientific pour cellules cultivées permet la ségrégation et l’enrichissement des protéines àAfficher plus
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RéférenceQuantité
788401 kit
Référence 78840
Prix (EUR)
694,00
Each
Quantité:
1 kit
Grand volume ou format personnalisé
Prix (EUR)
694,00
Each
Le kit de fractionnement subcellulaire de protéines Thermo Scientific pour cellules cultivées permet la ségrégation et l’enrichissement des protéines à partir de cinq compartiments cellulaires différents.

Caractéristiques du kit de fractionnement subcellulaire de protéines pour cellules cultivées :

Concis : permet d’extraire des fractions protéiques cytoplasmiques fonctionnelles, membranaires, nucléaires et solubles, liées à la chromatine et cytosquelettiques à partir de cellules de mammifères mises en culture en moins de 3 heures
Pratique : permet de suivre une procédure simple sans utiliser l’ultracentrifugation sur les gradients
Complet : permet d’obtenir des fractions protéiques cytoplasmiques, membranaires, nucléaires et solubles, liées à la chromatine et cytosquelettiques à partir d’un seul kit
Cellules mises en culture : élaboré et optimisé avec des cellules de mammifères mises en culture ; pour les échantillons de tissu, utilisez le kit de fractionnement subcellulaire de protéines pour les tissus
Compatible : utilisé avec une diversité d’applications en aval, notamment le dosage des protéines, le transfert Western, les analyses protéiques, les analyses de mobilité électrophorétique et les analyses de gènes rapporteurs et d’activité enzymatique.

Applications pour le fractionnement subcellulaire :
• Extraction et enrichissement des protéines de différents compartiments cellulaires
• Isolement des protéines cytoplasmiques, nucléaires, membranaires et cytosquelettiques à partir des mêmes cellules
• Profilage des cellules pour les protéines du cytoplasme, du noyau, de la membrane et du cytosquelette
• Étude de la translocation des protéines

Le fractionnement subcellulaire de protéines permet d’évaluer la localisation des protéines et l’enrichissement des protéines à partir de compartiments cellulaires spécifiques. Le kit de fractionnement subcellulaire des protéines Thermo Scientific comprend plusieurs réactifs pour la lyse progressive des cellules dans des fractions protéiques cytoplasmiques fonctionnelles, membranaires, nucléaires et solubles, liées à la chromatine et cytosquelettiques en moins de 3 heures. Les extraits de chaque compartiment subcellulaire présentent généralement moins de 15 % de contamination entre les fractions, ce qui est une pureté suffisante pour la plupart des expériences qui étudient la localisation et la redistribution des protéines.

Le kit de fractionnement subcellulaire des protéines pour cellules cultivées contient quatre tampons d’extraction, une nucléase stabilisée et un cocktail inhibiteur de protéase Halt Thermo Scientific. Chaque kit compte suffisamment de réactifs pour fractionner 50 culots de cellules de 20 µl chacun, à savoir l’équivalent d’environ 2 g de pâte cellulaire. (Pour les échantillons de tissus, utilisez notre kit de fractionnement subcellulaire des protéines pour les tissus.)

Le premier réactif du kit, lorsqu’il est ajouté à un culot cellulaire, provoque une perméabilisation sélective de la membrane, libérant ainsi des contenus cytoplasmiques solubles. Le deuxième réactif dissout le plasma, la mitochondrie et les membranes ER-golgi mais ne solubilise pas les membranes nucléaires. Après la récupération du noyau intact par centrifugation, un troisième réactif produit l’extrait nucléaire soluble. Une extraction nucléaire supplémentaire avec la nucléase micrococcale est réalisée pour relâcher les nucléoprotéines liées à la chromatine. Le culot insoluble récupéré est ensuite extrait avec le réactif final pour isoler les protéines cytosquelettiques.

Produits associés
Kit de fractionnement de protéines infracellulaires pour tissus
Centrifugeuses de paillasse
Usage exclusivement réservé à la recherche. Ne pas utiliser pour des procédures de diagnostic.
Spécifications
TamponTampon de lyse
Quantité1 kit
Type de réactifTampon de lyse cellulaire, solution détergente, fractionnement subcellulaire
Suffisant pour50 échantillons
FormeLiquide
Type de produitKit de fractionnement infracellulaire de protéines
Unit SizeEach
Contenu et stockage
Dès réception, conserver le kit à -20°C ou conserver les composants individuels comme indiqué ci-dessus.Le kit est expédié avec de la glace sèche.

Foire aux questions (FAQ)

What products are available for the isolation of subcellular components?

You can choose from several types of Dynabeads magnetic beads for coating with antibody against the subcellular component of choice. We currently do not offer any ready-to-use Dynabeads magnetic beads against a particular subcellular component, and recommend that you choose the beads that work best with your antibody and your application.

The following groups of Dynabeads magnetic beads can be used for this purpose:

(1) Surface Activated Dynabeads magnetic beads
Antibodies from any origin can be conjugated directly to these uncoated beads through covalent bonds. For better orientation of primary antibody on the beads, a secondary antibody (linker antibody) can be coated on the beads first. The Surface Activated Dynabeads magnetic beads are provided in different sizes (4.5, 2.8 and 1 micron) and the larger ones are mostly preferred for this application.

(2) Secondary Coated Dynabeads magnetic beads
These Dynabeads magnetic beads are pre-coated with a secondary antibody and depending on their specificity, they can be easily coated with your primary antibody within a short time period. These beads are provided in two sizes, 4.5 and 2.8 micron. In addition to these beads, our Dynabeads magnetic beads Protein A or Protein G can also be easily coated with antibody from several species. Please see the following links for information about all available Secondary coated Dynabeads magnetic beads and Dynabeads magnetic beads Protein A and Protein G.

(3) Streptavidin Coated Dynabeads magnetic beads
These Dynabeads magnetic beads are coated with streptavidin and require a biotinylated antibody. These beads are provided in two different sizes, 2.8 and 1 micron.

Find more information about Dynabeads magnetic beads at http://www.thermofisher.com/Dynabeads magnetic beads.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Protein Assays and Analysis Support Center.

Can you provide the shelf-life for the Subcellular Protein Fractionation Kit for Cultured Cells?

The Subcellular Protein Fractionation Kit for Cultured Cells is covered under our general 1-year warranty and is guaranteed to be fully functional for 12 months from the date of shipment, if stored as recommended. Please see section 8.1 of our Terms & Conditions of Sale (https://www.thermofisher.com/content/dam/LifeTech/Documents/PDFs/Terms-and-Conditions-of-Sale.pdf) for more details.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Protein Purification and Isolation Support Center.

Can I use the Subcellular Protein Fractionation Kit for Cultured Cells (Cat. No. 78840) for subsequent co-immunoprecipitation (co-IP) analysis of different nuclear proteins?

Yes, the nuclear fraction is compatible with co-immunoprecipitation (co-IP) after dialysis, desalting, or 50:50 dilution. The cytoplasmic and membrane fractions are compatible with co-IP directly after extraction and the pellet fraction is compatible with co-IP after detergent removal.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Protein Purification and Isolation Support Center.

Will M-PER Mammalian Protein Extraction Reagent extract membrane or cytoskeletal proteins?

M-PER Mammalian Protein Extraction Reagent can extract some membrane or cytoskeletal proteins, but the extraction efficiency is not consistent. The reagent was not intended to specifically extract these proteins. We recommend using Mem-PER Plus Membrane Protein Extraction Kit (Cat. No. 89842) for membrane protein extraction or Subcellular Protein Fractionation Kit for Cultured Cells (Cat. No. 78840) for compartmental extraction.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Cell Lysis and Fractionation Support Center.

What kits do you offer for cell fractionation?

We offer the following kits for cell fractionation:

Mem-PER Plus Membrane Protein Extraction Kit, Cat. No. 89842
NE-PER Nuclear and Cytoplasmic Extraction Reagents, Cat. No. 78835
Subcellular Protein Fractionation Kit for Cultured Cells, Cat. No. 78840
Subcellular Protein Fractionation Kit for Tissues, Cat. No. 87790
Mitochondrial Isolation Kit for Cultured Cells, Cat. No. 89874
Mitochondrial Isolation kit for Tissue, Cat. No. 89801
Lysosome Enrichment Kit for Tissues and Cultured Cells, Cat. No. 89839

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Citations et références (3)

Citations et références
Abstract
DRIM modulates Src activation and regulates angiogenic functions in vascular endothelial cells.
Authors:Tong J,Dong X,Martin TA,Yang Y,Dong B,Jiang WG
Journal:Cell biology international
PubMed ID:39648301
Downregulated in Metastasis Protein (DRIM) was discovered in malignant epithelial cells and was thought to be mainly a nucleus protein affecting cancer cells. Recent single-cell sequencing analysis suggests that DRIM is abundantly expressed in vascular endothelial cells. There has been no knowledge of the role of DRIM in the endothelium. ... More
Protocol to identify human subcellular alternative protein interactions using cross-linking mass spectrometry.
Authors:Garcia-Del Rio DF,Fournier I,Cardon T,Salzet M
Journal:STAR protocols
PubMed ID:37384523
Since the start of mass-spectrometry-based proteomics, proteins from non-referenced open reading frames or alternative proteins (AltProts) have been overlooked. Here, we present a protocol to identify human subcellular AltProt and decipher some interactions using cross-linking mass spectrometry. We describe steps for cell culture, in cellulo cross-link, subcellular extraction, and sequential digestion. ... More
Evaluation of a Low-Toxicity PARP Inhibitor as a Neuroprotective Agent for Parkinson's Disease.
Authors:Puentes LN,Lengyel-Zhand Z,Reilly SW,Mach RH
Journal:Molecular neurobiology
PubMed ID:33788167
Repurposing PARP-1 inhibitors (PARPi) for non-oncological applications offers an attractive therapeutic strategy for pathological conditions characterized by PARP-1 hyperactivity. In the context of Parkinson's disease (PD), PARP-1 hyperactivity has been linked to neuronal death and disease progression. From a therapy perspective, the evaluation of PARPi as neuroprotective agents may offer ... More