Y-PER™ Plus Dialyzable Yeast Protein Extraction Reagent

Le réactif Thermo Scientific Y-PER-Plus dialysable pour l’extraction de protéines de levure permet de lyser avec une grande efficacité les cellules de levure et bactériennes, et de solubiliser les protéines pour analyse.

Caractéristiques du réactif d’extraction de protéines de levure dialysable Y-PER Plus :

• Formulation stable conçue pour le stockage à température ambiante
• Génère des extraits protéiques par une simple incubation de 20 minutes sans aucune manipulation
• N’exige aucune rupture mécanique des cellules ni long traitement enzymatique
• Le tampon à base de Tris présente une force ionique très faible et ne contient pas de chlorure de sodium
• Cette formulation simple ne contient aucun agent réducteur ou chélateur
• Une formulation entièrement dialysable, permettant un échange complet de la protéine extraite dans tout tampon requis par les techniques en aval
• Compatible avec les dosages de protéines Thermo Scientific Pierce BCA et Coomassie Plus

Détails du produit (recommandations pour l’utilisation) :
• Cellules fraîches et cellules congelées : Le réactif Y-PER-Plus est capable d’extraire les protéines également bien des cellules fraîchement récoltées et congelées
• Densité cellulaire et variation de la souche : Les différences relatives au taux de croissance entre les organismes, à la température de croissance et aux composition des milieux, affectent le nombre de cellules pouvant être récoltées à partir d'un volume de culture donné. C'est pourquoi plusieurs suggestions en termes de quantité de réactif Y-PER-Plus à utiliser en fonction du poids d'un culot cellulaire donné (pâte de cellules mouillées) sont indiquées.
• Pichia pastoris : Afin de lyser des cellules cultivées dans des milieux riches comme le YEPD, les cellules doivent être récoltées pendant la phase log de la croissance. Afin d’améliorer la lyse cellulaire en phase stationnaire, ajouter directement du DTT ou du TCEP-HCl (à une concentration finale de 0,1 M et de 20 à 50 mM, respectivement) au réactif Y-PER-Plus avant la lyse pour libérer davantage de protéines solubles. Pour obtenir de meilleurs résultats, utiliser 2,5 à 5,0 ml de réactif Y-PER-Plus pour 1 gramme de pâte cellulaire ; augmenter ou réduire les quantités si nécessaire. Hormis des agents réducteurs, il est possible d’ajouter un inhibiteur de protéases, suivi par une incubation à 45°C.
• Saccharomyces cerevisiae : Pour obtenir de meilleurs résultats, récolter les cellules en phase log. Afin d’augmenter le rendement en cellules en phase stationnaire, ajouter directement du DTT ou du TCEP·HCl (à une concentration finale de 0,1 M et de 20 à 50 mM, respectivement) au réactif Y-PER-Plus avant l’extraction. En termes de résultats d’efficacité, aucune différence n’est constatée entre des milieux riches ou synthétiques définis. Pour obtenir de meilleurs résultats, utiliser 2,5 à 5,0 ml de réactif Y-PER-Plus pour 1 gramme de pâte cellulaire ; augmenter ou réduire les quantités si nécessaire.
• Schizosaccharomyces pombe : Pour de meilleurs résultats, utiliser le réactif Y-PER (N° de réf. 78990) d’origine pour extraire des protéines à partir de S. pombe.
• Bacillus subtilis : Le réactif Y-PER-Plus n’extrait pas de protéines des spores de B. subtilis. En cas d'utilisation d'une souche capable de sporuler, récolter les cellules en phase log. Pour les souches qui sont incapables de sporuler, les cellules peuvent être cultivées jusqu'à saturation avant la récolte. Utiliser 2,5 à 5,0 ml de réactif Y-PER-Plus pour 1 g de pâte cellulaire ; augmenter ou réduire les quantités si nécessaire.
• Escherichia coli : Utiliser 2,5 à 5,0 ml de réactif Y-PER-Plus pour 1 g de pâte cellulaire ; augmenter ou réduire les quantités si nécessaire.
• Activité enzymatique : Étant donné que les protéines présentent toutes des structures, solubilités et stabilités différentes, il est possible que l’activité optimale d’une protéine ne soit pas conservée en présence du réactif Y-PER-Plus. Par exemple, le réactif Y-PER d’origine est très efficace lorsque l’on teste l’activité de la bêta-galactosidase, mais le réactif Y-PER-Plus ralentit sa cinétique. Le réactif Y-PER-Plus est compatible avec les protocoles standard de purification par affinité pour la glutathion S-transférase (GST) et les protéines marquées par His.

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