Kit de fractionnement de peptides en phase inversée à pH élevé Pierce™
Thermo Scientific™

Kit de fractionnement de peptides en phase inversée à pH élevé Pierce™

Le kit de fractionnement de peptides en phase inverse à pH élevé Thermo Scientific™ Pierce™ augmente l’identification des protéines àAfficher plus
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Référence 84868
Prix (EUR)
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Le kit de fractionnement de peptides en phase inverse à pH élevé Thermo Scientific™ Pierce™ augmente l’identification des protéines à partir de l’analyse LC / MS grâce au fractionnement de peptides orthogonaux d’échantillons de peptides complexes.

Facile à utiliser : résine fournie au format colonne de centrifugation à usage unique
Identifications améliorées des protéines : les identifications de protéines ont augmenté de ≥ 50 % par rapport aux échantillons non fractionnés
Reproductible : les profils d’élution et la résolution fractionnaire varient de moins de 20 %
Optimisé : procédure robuste pour l’identification maximale des protéines et la récupération des peptides tout en minimisant le chevauchement fractionnaire
Compatible : réactifs validés avec une variété d’échantillons complexes, y compris des peptides marqués au TMT™

Afin de permettre le séquençage de protéomes profonds, il est souvent nécessaire de réduire la complexité de l’échantillon par fractionnement dans une dimension orthogonale avant l’analyse LC / MS. Le kit de fractionnement de peptides en phase inverse à pH élevé Pierce utilise la chromatographie en phase inversée à pH élevé pour séparer les peptides par hydrophobicité et fournit une excellente orthogonalité aux gradients LC-MS en phase inversée à pH faible.

Le kit a été conçu pour améliorer l’identification des protéines grâce à l’utilisation d’une résine en phase inversée exclusive dans un format de colonne de centrifugation facile à utiliser avec un protocole de fractionnement à pH élevé. Contrairement au fractionnement d’échangeur de cations fort (SCX), les fractions en phase inversée à pH élevé ne nécessitent pas d’étape de dessalage supplémentaire avant l’analyse LC / MS.

Le kit de fractionnement de peptides en phase inversée à pH élevé comprend un tampon à pH élevé (0,1 % de triéthylamine) et douze colonnes de centrifugation contenant de la résine en phase inversée résistante au pH. Chaque colonne de fractionnement en phase inversée permet le fractionnement de 10 à 100 µg d’échantillons de peptides à l’aide d’une microcentrifugeuse.

Les échantillons natifs, phosphorylés, marqués Tandem Mass Tag™ (TMT™) et d’autres échantillons complexes de mélanges de peptides peuvent être fractionnés à l’aide de ce kit. La combinaison des résultats de recherche générés par les fractions individuelles permet d’améliorer la couverture des séquences protéiques et d’augmenter le nombre de protéines identifiées par rapport aux échantillons non fractionnés.

Applications :
• Réduction de la complexité des échantillons afin d’identifier les cibles d’intérêt
• Réalisation d’études de biologie des systèmes
• Réduction de la complexité des échantillons pour améliorer les études d’analyse quantitative
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.
Spécifications
Type de produit finalpeptides
À utiliser avec (équipement)Microcentrifugeuse
Quantité12 réactions
Étape du flux de travailFractionnement
Méthode de détectionSpectrométrie de masse
FormatKit
Gamme de produitsPierce
Type de produitKit de fractionnement des peptides
Matériau de départPeptides, protéine digérée par la protéase
Unit SizeEach
Contenu et stockage
Colonnes de fractionnement en phase inversé, 12 colonnes
Triéthylamine (0,1 %), 100 ml

Stocker au réfrigérateur (entre 2 et 8°C).

Foire aux questions (FAQ)

Can I purchase the Reversed-Phase Fractionation Spin Columns from the Pierce High pH Reversed-Phase Peptide Fractionation Kit (Cat. No. 84868) separately?

No, the spin columns from this kit cannot be purchased separately. However, if you are only using these columns to remove salts from your peptide samples, you can purchase the Pierce Peptide Desalting Spin Columns (Cat. No. 89851, 89852), as an alternative.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Mass Spectrometry Support Center.

How much starting material is needed to fractionate my samples using the Pierce High pH Reversed Phase Fractionation Kit (Cat. No. 84868)?

A minimum of 100 µg of protein as starting material from the digestion step is needed for fractionation using eight fractions. Less starting material would be needed if fewer fractions are used. If peptides are being measured, the range of peptide to be loaded on these columns is 10 to 100 µg.

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I want to fractionate a complex mass spectrometry sample, but my sample is different from the one described in the manual for the Pierce High pH Reversed-Phase Peptide Fractionation Kit. Should I use a customized fractionation gradient?

Recommended gradients are available for typtic protein digest samples with or without TMT labeling. Use of other chemical labels, performing selective peptide enrichment, or using a different digestion enzyme other than trypsin may affect the elution profile of the peptides during fractionation. For the best sample peptide coverage, an ideal elution profile would result in relatively equal amounts of peptides in each fraction.

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After running the Pierce TMT11plex Yeast Digest Standard, I observe low signal to noise ratio and poor quantitation accuracy for the Tandem Mass Tag (TMT) reporter ions. What do you recommend?

Here are some recommendations:

- Clean and recalibrate the mass spectrometry instrument using one of our Pierce Calibration Solutions (https://www.thermofisher.com/search/browse/category/us/en/600654).
- Verify settings for liquid chromatography (LC) acquisition methods.
- Fractionate TMT-labeled samples using the Pierce High pH Reversed-Phase Peptide Fractionation Kit (Cat. No. 84868) to reduce sample complexity.

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I have a lower number of peptide/protein identification in my combined TMT-labeled samples compared to the unlabeled sample. What can I do?

We recommend fractionating the sample using the Pierce High pH Reversed-Phase Peptide Fractionation Kit (Cat. No. 84868), to reduce the sample complexity before LC-MS analysis and thus increase the number of quantifiable peptides/proteins for multiplexed samples.

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Citations et références (3)

Citations et références
Abstract
Targeted Protein Degradation through Recruitment of the CUL4 Complex Adaptor Protein DDB1
Authors:Meyers M, Cismoski S, Panidapu A, Chie-Leon B, Nomura DK.
Journal:ACS Chem Biol
PubMed ID:38192078
Targeted protein degradation has arisen as a powerful therapeutic modality for eliminating proteins. Thus far, most heterobifunctional proteolysis targeting chimeras (PROTACs) have utilized recruiters against substrate receptors of Cullin RING E3 ubiquitin ligases, such as cereblon and VHL. However, previous studies have surprisingly uncovered molecular glue degraders that exploit a ... More
Generating high quality libraries for DIA MS with empirically corrected peptide predictions.
Authors:Searle BC,Swearingen KE,Barnes CA,Schmidt T,Gessulat S,Küster B,Wilhelm M
Journal:Nature communications
PubMed ID:32214105
Data-independent acquisition approaches typically rely on experiment-specific spectrum libraries, requiring offline fractionation and tens to hundreds of injections. We demonstrate a library generation workflow that leverages fragmentation and retention time prediction to build libraries containing every peptide in a proteome, and then refines those libraries with empirical data. Our method ... More
Proteomics of prostate cancer serum and plasma using low and high throughput approaches
Authors:Hamza GM, Raghunathan R, Ashenden S, Zhang B, Miele E, Jarnuczak AF.
Journal:Clin Proteomics
PubMed ID:38475692
Despite progress, MS-based proteomics in biofluids, especially blood, faces challenges such as dynamic range and throughput limitations in biomarker and disease studies. In this work, we used cutting-edge proteomics technologies to construct label-based and label-free workflows, capable of quantifying approximately 2,000 proteins in biofluids. With 70µL of blood and a ... More