Le kit de purification de centrifugation HisPur Ni-NTA Thermo Scientific contient 0,2 ml de colonnes de centrifugation HisPur Ni-NTA, ainsi que des tampons nécessaires pour purifier les protéines “taguées” à la polyhistidine. La résine HisPur Ni-NTA contient une résine de nickel IMAC haute capacité et haute performance pour la purification par affinité courante des protéines hybrides “taguées” par l’His.

Caractéristiques de la résine HisPur Ni-NTA :

• Haute capacité — liaison jusqu’à 60 mg de 6 protéines marquées à l’histidine par millilitre de résine
•Polyvalente — purifier les protéines en utilisant des conditions natives ou dénaturantes
• Compatible — utilisation avec les réactifs de lyse cellulaire Thermo Scientific et un large éventail d’additifs tampon
• Économique — réutiliser le même lot de résine au moins cinq fois
• Facile à utiliser — tampons pré-formulés par disponibles pour les formats de kit
• Flexibl — disponibles en plusieurs formats, y compris la résine en vrac, les colonnes de centrifugation, les cartouches de chromatographie et les plaques filtrantes à 96 puits

Le support spécialement préparé est composé d’agarose en microbilles dérivatisée à l’aide du groupe chélateur de l’acide nitrilotriacétique (NTA) et chargé avec des ions nickel divalents (Ni²⁺). La résine de chromatographie d’affinité sur ions métalliques immobilisés (IMAC) offre une excellente capacité de liaison haute performance pour purifier des protéines recombinantes “tagées” à l’His.

L’expression et la purification des protéines recombinantes sont essentielles aux études de régulation, structure et fonction des protéines. La majorité des protéines recombinantes sont exprimées en fusions avec des “tags” d’affinité courts, les plus populaires étant le marqueur polyhistidine (6xHis). La méthode utilisée pour purifier les protéines recombinantes “taguées” à l’His est la chromatographie d’affinité sur ions métalliques immobilisés (IMAC), composée de résines chélatrices chargées d’ions nickel ou cobalt qui se coordonnent avec les chaînes latérales de l’histidine.

La résine Ni-NTA HisPur garantit la purification efficace de niveaux élevés de protéines hybrides “taguées” à l’His en trop grande quantité à partir de lysats bactériens, tels que ceux obtenus avec les réactifs d’extraction de protéines bactériennes Thermo Scientific B-PER. La résine offre des résultats performants pour la fixation par lots et les procédures basées sur des colonnes de centrifugation à de nombreuses échelles. Ses performances sont comparables ou supérieures à celles des résines Ni-NTA réputées d’autres fabricants. La résine Ni-NTA HisPur est un support d’affinité de haute qualité, stable et résistant. Les tests confirment l’absence de toute dégradation des performances de la résine après au moins cinq utilisations consécutives. Ces données indiquent que la résine est très résistante à la dégradation structurelle ou à la fuite d'ions nickel en utilisation normale.

La résine Ni-NTA HisPur et la résine de cobalt HisPur sont des formes alternatives d’IMAC, la première utilisant le nickel et la seconde utilisant le cobalt comme ion métallique chélaté responsable de la liaison par marquage à l’His. Les résines NI-NTA, dans le cadre de l’IMAC, ont été privilégiées pour les purifications de protéines de “tag” au 6xHis en raison des quatre sites de liaison aux métaux sur le chélate, ce qui permet la liaison de protéines élevées et le lessivage d’ions à faible teneur en métal. Le cobalt se lie moins fortement et donc de manière plus discriminatoire. Il offre ainsi une plus grande pureté, mais un rendement plus faible lors la purification de protéines “taguées” à l’His.

Formats disponibles :
• Suspensions épaisses de résine—agarose en microbilles réticulée à 6 % ; flacons de 10 ml, 100 ml, 500 ml
• Colonnes de centrifugation—colonnes de 0,2 ml (microcentrifugeuse), 1 ml, 3 ml
• Kits de purification—kits complets dans les trois tailles de colonne
• Cartouches de chromatographie—pour en savoir plus et voir les données de cartouche de chromatographie HisPur
• Plaques de centrifugation 96 puits

Produits associés
Résine Ni-NTA HisPur™
Colonnes de centrifugation Ni-NTA HisPur™, 0,2 ml