Les microbilles magnétiques de Ni-NTA HisPur Thermo Scientific sont des microbilles de nickel-IMAC à haute capacité pour la purification par affinité des protéines hybrides marquées à l’histidine dans des formats manuels ou automatisés.

Caractéristiques des microbilles magnétiques de Ni-NTA HisPur :

• Haute capacité—capacité de liaison équivalente ou supérieure aux microbilles magnétiques Ni-NTA proposées par d’autres fournisseurs
• Faible liaison non spécifique—la surface des microbilles est prébloquée et le protocole fournit des tampons optimisés pour la purification
• Rapide—le protocole est réalisé en 1 heure
• Évolutif—prise en charge de volumes d’échantillon allant du microlitre au millilitre
• Polyvalent—permet la purification des protéines en conditions natives ou dénaturantes
• Compatible avec les réactifs—peut être utilisé avec des réactifs de lyse cellulaire ordinaires et un large éventail d’additifs tampon
• Formats multiples—couplage des protéines aux microbilles et applications en aval manuelles ou sur plate-forme automatisée (par ex., instruments Thermo Scientific KingFisher)

La surface des microbilles magnétiques bloquées est dérivatisée à l’aide du groupe chélateur de l’acide nitrilotriacétique (NTA) et chargée avec des ions nickel divalents (Ni²⁺). Les microbilles utilisées pour la chromatographie d’affinité par métal immobilisé (IMAC) offrent une grande capacité de liaison et engendrent un faible bruit de fond. Les microbilles magnétiques-HisPur Ni-NTA peuvent être utilisées manuellement avec un portoir magnétique ou sur des plates-formes automatisées, telles que les instruments Thermo Scientific KingFisher, pour des manipulations haut débit.

Les microbilles magnétiques-HisPur Ni-NTA sont conçues tant pour une purification par affinité à petite échelle que pour un screening haut débit des protéines recombinantes marquées à l’histidine. L’étiquette polyhistidine est la plus utilisée des étiquettes par affinité et comporte généralement des résidus de six histidines consécutives (6xHis). Ces protéines marquées sont surexprimées chez un certain nombre d’organismes différents, le plus souvent chez les bactéries, et sont purifiées à partir de lysats cellulaires, tels que ceux que l’on obtient à l’aide de réactifs d’extraction de protéines bactériennes B-PER. La purification des protéines marquées à l’histidine est obtenue en utilisant un chélateur NTA chargé avec du nickel qui se lie aux chaînes latérales de l’histidine. Le chélateur NTA comporte quatre sites de liaison avec les métaux, ce qui réduit le lessivage des ions métalliques et augmente la capacité de liaison. Le protocole utilisant les microbilles magnétiques-HisPur Ni-NTA a été optimisé pour obtenir un degré élevé de pureté des protéines marquées à l’histidine ainsi isolées. La performance est équivalente ou supérieure à celle de microbilles magnétiques-Ni-NTA proposées par d’autres fournisseurs.