Les colonnes de centrifugation pour protéine G Thermo Scientific Nab sont pratiques pour procéder rapidement et à petite échelle à la purification par affinité d’anticorps provenant de divers types d’échantillons. Chaque colonne contenant 1 ml de résine de protéine immobilisée permet une purification rapide de 11 à 15 mg d’IgG humaine à partir de 0,5 à 2 ml de sérum ou d’un autre échantillon.

L’agarose Pierce Protéine G est une résine d’affinité de qualité supérieure pour la purification des anticorps. Il est composé de protéine G recombinante ayant été immobilisée par liaison covalente sur des microbilles d’agarose réticulée à 6 % de haute qualité (CL-6B). Cette variété particulière de l’affinité de la résine fournit la combinaison la plus polyvalente de caractéristiques chromatographiques et permet une purification à haut rendement et de haute pureté pour les IgG entières provenant d’échantillons de sérum de mammifères. Les propriétés physiques et chimiques des billes d’agarose conviennent à de nombreux systèmes de purification par affinité.

Caractéristiques de l’agarose Pierce protéine G :

• Protéine G – la protéine G immobilisée est idéale pour la purification d’IgG polyclonale à partir de sérum de souris, d’humain, de vache, de chèvre et de mouton, y compris les isotypes d’IgG3 humaine et d’IgG1 de souris
• Résine d’agarose – le support est constitué d’agarose en billes réticulée à 6 % (CL-6B), la plus populaire des résines pour les méthodes de purification par affinité des protéines
• Inerte et stable– la méthode de fabrication supérieure immobilise la protéine G par des liaisons covalentes résistantes à la lixiviation et exemptes de charges, générant des liaisons non spécifiques faibles et permettant plusieurs utilisations sans baisse de rendement
• Capacité standard – l’agarose avec protéine G Pierce possède une charge normale de protéine G immobilisée, offrant une capacité de liaison supérieure à celle de la résine de 11 à 15 mg d’IgG humaine par ml

La protéine G est une protéine de la paroi cellulaire provenant du groupe G Streptococcus et est maintenant produite en tant que protéine recombinante dans E. coli. Comme la protéine A, la protéine G se lie à la plupart des immunoglobulines de mammifères, principalement par leurs régions Fc. La protéine G native contient deux sites de liaison des immunoglobulines, ainsi que des sites de liaison de l’albumine et de surface cellulaire. Dans la forme recombinante de la protéine G, ces sites de liaison de l’albumine et de surface cellulaire ont été éliminés afin de réduire les liaisons non spécifiques lors de la purification des immunoglobulines. La protéine G recombinante a une masse d’environ 21,6 kDa, mais sa taille apparente par SDS-PAGE est comprise entre 31 et 34 kDa. La fonction de liaison des IgG est optimale à pH 5 mais se produit également de façon efficace dans des conditions proches de la neutralité (pH 7,0 à 7,2).

Comparée à la protéine A, la protéine G se lie à un spectre plus étendu de sous-classes d’IgG de sérum humain, de souris et de rat. En particulier, outre sa capacité de liaison à d’autres isotypes, tout comme la protéine A, la protéine G présente une capacité de liaison plus importante aux IgG3 humaines, aux IgG1 de souris et aux trois isotypes d’IgG de rat. La protéine G est donc généralement recommandée pour des applications impliquant ces espèces et ces isotypes d’anticorps. Concernant les autres espèces, la protéine G présente une capacité de liaison plus importante pour les IgG de vache, de chèvre et de mouton, mais elle se lie plus faiblement que la protéine A aux IgG de porc, de cobaye, de chien et de chat.

L’agarose Pierce Protéine G est préparée à l’aide de l’appareil de chimie de couplage Thermo Scientific AminoLink, qui offre plusieurs avantages sur les méthodes d’immobilisation de ligand. L’immobilisation par AminoLink génère une combinaison entre les monomères de sucre des microbilles d’agarose et les résidus de lysine native sur la protéine A par de simples liaisons d’amides. Contrairement à l’immobilisation typique par bromure de cyanogène (CNBr), la méthode AminoLink n’introduit aucun nouveau groupe chimique qui pourrait causer une liaison non spécifique non désirée et produit une liaison stable, essentiellement irréversible. Ceci donne une résine à forte capacité de liaison pouvant retenir la protéine G immobilisée fonctionnelle pendant plusieurs cycles de purification des anticorps.

L’agarose Pierce Protéine G est efficace pour la purification des IgG par affinité à partir de sérum et d’autres liquides provenant de nombreuses espèces de mammifères. La protéine G se prête particulièrement à une utilisation avec les anticorps de souris (y compris les IgG1) en plus de la plupart des isotypes d’IgG pour les échantillons humains, de chèvre et de mouton.

Propriétés de l’agarose en microbilles réticulée à 6 % (CL-6B) :
• Stabilité du pH : 2 à 14 (court terme) ; 3 à 13 (long terme)
• Dimension moyenne des particules : 45 à 165 microns
• Limite d’exclusion : 10 000 à 4 000 000 daltons
• Débit volumétrique maximal : environ 1 ml/minute (pour une colonne de 1 cm de diamètre)
• Vitesse linéaire maximale : 30 cm/heure
• Pression maximale : moins de 25 psi (1,5 bar), définie comme la chute de pression maximale dans une colonne que la résine peut supporter (remarque : La pression manométrique indiquée d’un appareil de chromatographie en phase liquide peut mesurer la pression totale du système plutôt que la chute de pression dans la colonne.)

Autres données sur le produit
• Purification d’anticorps à l’aide de protéines de liaison d’anticorps

Produits connexes
Agarose avec protéine G Pierce™
Kit de centrifugation avec protéine G NAb™, 1 ml