Pierce™ Protein G-Agarose

Die Thermo Scientific NAb Protein G-Spin-Kits eignen sich für die schnelle Affinitätsreinigung von Antikörpern im kleinen Maßstab aus einer Vielzahl von Probentypen. Jede vorgefüllte Mikrozentrifugen-Spin-Säule des immobilisierten Proteinharzes ermöglicht eine schnelle Aufreinigung von 11 bis 15 mg humanem IgG aus 0,5 bis 2 ml Serum oder einer anderen Probe. In jedem Kit sind ausreichend Entnahmeröhrchen, Puffer und ein optimiertes Protokoll zur Reinigung von mindestens zwei Antikörperproben enthalten.

Pierce Protein G-Agarose ist ein erstklassiges Affinitätsharz für die Antikörperaufreinigung. Es besteht aus rekombinantem Protein G, das auf 6%igem, hochwertigen, vernetzten Agarosegranulat (CL-6B) kovalent immobilisiert wurde. Diese spezielle Affinitätsharz-Variante zeichnet sich durch die vielseitigste Kombination chromatographischer Eigenschaften aus und sorgt bei der Aufreinigung von intaktem IgG aus Serumproben von Säugetieren für eine hohe Ausbeute und Reinheit. Dank der physikalischen und chemischen Eigenschaften eignet sich das Agarosegranulat für viele Systeme zur Affinitätsreinigung.

Merkmale von Pierce Protein G-Agarose:

• Protein G – immobilisiertes Protein G ist ideal für die polyklonale IgG-Aufreinigung von Maus-, Human-, Kuh-, Ziegen- und Schafserum geeignet, einschließlich humaner IgG3- und Maus-IgG1-Isotypen
• Agarose-Harz – der Träger ist eine vernetzte 6%ige gekörnte Agarose (CL-6B), das beliebteste Harz für Verfahren zur Affinitätsreinigung von Proteinen
• Inert und stabil – erstklassiges Fertigungsverfahren immobilisiert Protein G durch ladungsfreie, Laugen-resistente kovalente Bindungen, die zu einer geringen unspezifischen Bindung führen und ohne Ausbeuteverlust vielfältig einsetzbar sind
• Standardkapazität – Pierce Protein G-Agarose enthält eine normale Menge an immobilisiertem Protein G und bietet ein Bindungsvermögen von 11 bis 15 mg humanem IgG/ml Harz

Protein G ist ein bakterielles Zellwandprotein, das ursprünglich von Streptokokken der Gruppe G stammt und jetzt rekombinant in E. coli hergestellt wird. Wie Protein A bindet Protein G die meisten Säugetier-Immunglobuline erstrangig durch ihre Fc-Regionen. Natives Protein G enthält zwei Immunglobulin-Bindungsstellen sowie Bindungsstellen für Albumin und Zelloberflächen. In der rekombinanten Form von Protein G wurden diese Bindungsstellen für Albumin und Zelloberflächen eliminiert, um bei der Aufreinigung von Immunglobulinen die Wahrscheinlichkeit unspezifischer Bindungen zu reduzieren. Rekombinantes Protein G besitzt eine Molekülmasse von ca. 21,6 kDa, seine im SDS-PAGE-Verfahren ermittelte scheinbare Masse beträgt jedoch 31 bis 34 kDa. Die IgG-Bindungsfunktion ist bei einem pH-Wert von 5 optimal, tritt jedoch auch effizient unter pH-neutralen Bedingungen (pH-Wert 7,0 bis 7,2) auf.

Im Vergleich zu Protein A bindet Protein G ein breiteres Spektrum an IgG-Subklassen von humanem, Maus- und Rattenserum. Protein G bindet andere Isotypen genauso gut wie Protein A, zeigt aber eine stärkere Bindungsaffinität für humanes IgG3, IgG1 der Maus und allen drei Isotypen von IgG der Ratte. Deswegen wird Protein G in der Regel für Anwendungen empfohlen, bei denen diese Antikörper-Arten und -Isotypen zum Einsatz kommen. In Bezug auf andere Arten bietet Protein G Bindungen höherer Kapazität für IgG von Rind, Ziege und Schaf, bindet jedoch IgG des Schweins, Meerschweinchens, Hundes und der Katze IgG schwächer als Protein A.

Pierce Protein G-Agarose wird mithilfe der Thermo Scientific AminoLink Kopplungs-Chemie hergestellt. Diese bietet im Vergleich zur herkömmlichen Ligandenimmobilisierung mehrere Vorteile. Bei der AminoLink-Immobilisierung entsteht über einfache Amidbindungen eine Konjugation zwischen Zuckermonomeren des Agarosegranulats und den nativen Lysin-Resten auf dem Protein A. Im Gegensatz zur herkömmlichen Immobilisierung mit Cyanbromid (CNBr) werden durch die AminoLink-Methode keine neuartigen chemischen Gruppen eingebracht, die zu unerwünschten unspezifischen Bindungen führen könnten, und es wird eine stabile und weitgehend irreversible Bindung erzeugt. Das Ergebnis ist ein Harz mit hohem Bindungsvermögen, das auch nach mehreren Runden von Antikörperreinigungen funktionelles immobilisiertes Protein A enthält.

Pierce Protein G-Agarose eignet sich für die Affinitätsreinigung von IgG aus Serum und anderen Flüssigkeiten vieler Säugetierarten. Protein G eignet sich neben den meisten IgG-Isotypenproben von Mensch, Ziege und Schaf besonders für den Einsatz mit Maus-Antikörpern (einschließlich IgG1).

Merkmale des vernetzten 6%igen Agarosegranulats (CL-6B):
• Unterstützung der pH-Stabilität: 2 bis 14 (kurzfristig); 3 bis 13 (langfristig)
• Durchschnittliche Partikelgröße: 45 bis 165 Mikrometer
• Ausschlussgrenze: 10.000 bis 4.000.000 Dalton
• Maximale volumetrische Durchflussrate: Ca. 1 ml/Minute (für Säulendurchmesser 1 cm)
• Maximale lineare Geschwindigkeit: 30 cm pro Stunde
•Maximaler Druck: weniger als 25 psi (1,5 bar), definiert als der maximale Druckabfall in einer Säule, dem das Harz standhalten kann (Hinweis: Der angezeigte Manometerdruck des Flüssigkeitschromatographiegeräts gibt möglicherweise den Gesamtsystemdruck und nicht den Druckabfall an der Säule wieder.)

Weitere Produktdaten
• Verwendung von Antikörperbindungsproteinen für die Antikörperaufreinigung

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