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Invitrogen™

GeneArt™ CRISPR Nuclease Vector with CD4 Enrichment Kit (with competent cells)

Le vecteur de nucléase CRISPR GeneArt™ avec le kit d’enrichissement CD4 est un système de vecteur pour l’expression des composantsAfficher plus
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RéférenceQuantité
A2117710 reactions
Référence A21177
Prix (EUR)
942,00
Each
Quantité:
10 reactions
Prix (EUR)
942,00
Each
Le vecteur de nucléase CRISPR GeneArt™ avec le kit d’enrichissement CD4 est un système de vecteur pour l’expression des composants fonctionnels nécessaires à l’édition du génome CRISPR/Cas9 dans les cellule de mammifères avec un rapporteur CD4. Le rapporteur CD4 permet l’enrichissement basé sur des microbilles, une option pour le tri/l’enrichissement basé sur des microbilles magnétiques des cellules exprimant CRISPR Cas9 à l’aide de microbilles magnétiques Dynabeads™ CD4. L’efficacité de la transfection peut également être suivie à l’aide d’anticorps fluorescents anti-CD4. Les vecteurs de nucléase linéarisés GeneArt™ CRISPR permettent de cloner rapidement et efficacement des oligonucléotides bicaténaires par codage d’ARNcr représentant une cible souhaitée dans une cassette d’expression qui permet de cibler le nucléase Cas9 spécifiquement à la séquence. Cette version du kit comprend les cellules compétentes OneShot™ TOP10. Une version sans cellules compétentes est également disponible (n° cat. A21175).

Le système de vecteur de nucléase GeneArt CRISPR™ avec cellules compétentes offre :

• Système d’ingénierie génomique facile à concevoir
• Vecteurs de clonage abordables et prêts à l’emploi
• Enrichissement pour des lignées cellulaires difficiles à transfecter ou difficiles à modifier
• Cellules compétentes incluses pour une meilleure commodité et une efficacité de clonage optimale

Système de vecteurs tout-en-un pour l’édition génomique basée sur CRISPR
Le kit de vecteur de nucléase CRISPR GeneArt™ offre un système de vecteur d’expression tout-en-un, simple et prêt à l’emploi, composé à la fois d’une cassette d’expression de nucléase Cas9 et d’une cassette de clonage d’ARN guide (ARNg) pour un clonage rapide et efficace de l’ADN qui code l’ARN CRISPR spécifique à la cible (ARNc). Ce système vous permet d’éditer et de concevoir un locus génomique de choix d’une manière spécifique à la séquence à partir d’un plasmide simple. Une fois que les cibles pertinentes ont été identifiées avec des vecteurs GeneArt™ CRISPR rapides et faciles à utiliser, les mutations biologiquement pertinentes peuvent être créées avec les Precision TALs GeneArt™, avec une spécificité élevée et des effets hors cible faibles.

Besoin d’aide pour la conception de l’ARNg CRISPR ?
Notre nouvel outil de recherche et de conception CRISPR vous permet de rechercher dans notre base de données de >600 000 ARNg CRISPR préconçus dans les gènes d’humains et de souris ou d’analyser votre séquence d’intérêt pour les conceptions de l’ARNg de novo à l’aide de nos algorithmes exclusifs. Les séquences CRISPR sont optimisées pour l’extinction des gènes et pour cibler les trois premiers exons transcrits pour chaque gène. Les résultats de recherches incluent les six premières séquences CRISPR avec des sites PAM, une cartographie des exons avec les sites de liaison d’ARNg et les sites de liaisons potentiels hors cible pour chaque séquence CRISPR. L’outil saura concevoir le format correct d’ARNg pour votre produit CRISPR-Cas9 préféré, notamment les oligos pour votre vecteur de nucléase GeneArt™ CRISPR. Commencez la conception dès aujourd’hui >

Ressources
Protocole présenté : Développement des cellules souches avec CRISPR-Cas9
Protocole présenté : Microinjection de CRISPR-Cas9 chez les souris et les embryons de zèbre
Usage exclusivement réservé à la recherche. Ne pas utiliser pour des procédures de diagnostic.
Spécifications
Méthode de clonageEnzyme de restriction / MCS
FormatKit
Nbre de réactions10 réactions
En surplombSaillies de 3’
Gamme de produitsGeneArt
Type de produitVecteur de nucléase Crispr avec kit d’enrichissement CD4
AccélérateurU6, CMV
Marqueur de protéineFusion CD4
Quantité10 reactions
Gène rapporteurCD4
Matériau de départOligos (ADN)
Suffisant pour10 réactions
TechniqueCRISPR-Cas9
Méthode de détectionAmorce-sonde
À utiliser avec (application)Expression génique, Clonage
FormeLiquide
Vitesse de réactionRapide
Unit SizeEach
Contenu et stockage
• Vecteur de nucléase CRISPR CD4 linéarisé
• Tampon de renaturation oligonucléotide 10X
• Eau exempte de DNase / ARNase
• Tampon de ligature 5X
• DNA Ligase T4
• Amorce sens de séquençage U6
• Contrôle, oligonucléotide double brin
Conserver les éléments ci-dessus entre -5 et -30°C.

• Cellules chimiquement compétentes TOP10 OneShot™
Conserver à -80°C.

Foire aux questions (FAQ)

What is CRISPR-STOP?

CRISPR-STOP is a method of inserting STOP codon sequences to generate knockouts.

Please refer to the following article: CRISPR-STOP: gene silencing through base-editing-induced nonsense mutations.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Genome Editing Support Center.

How do I check for off-target effects in my CRISPR-modified cell lines?

The only complete way to confirm that there are no off-target effects is to sequence the entire genome of your cell. Alternatively, a less thorough means of checking for off-target editing is to perform targeted sequencing of sequences with the highest probability of off-target effects (i.e., most similar to your CRISPR target region).

How many guide RNAs do you recommend designing against my desired edit locus?

A single guide RNA (gRNA) is all that is required for targeting, but we do recommend testing 2-3 gRNAs against each locus being targeted for cleavage. Testing multiple gRNAs increases the chances of finding a gRNA with high editing efficiency, which will reduce the screening time required to identify the clone of interest.

What are the benefits of using TAL/TALEN-based genome editing compared to your CRISPR system?

Invitrogen GeneArt Precision TALs, in addition to gene deletion, down-regulation and integration, can also be used for gene activation. Additionally, the system is based on a protein-DNA system, in contrast to CRISPR, which is based on a RNA-DNA system. TALs can be used to target any gene in any cell, including mammalian, bacterial, yeast, plants, insect, stem cells and zebrafish. Lastly, off-target effects are low when using the TAL system. Please refer to the following paper (http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S016816561500200X) where the authors compared TALs and CRISPR technology.

I am using the Invitrogen GeneArt CRISPR Nuclease Vector Kit and am getting very few ampicillin-resistant colonies on my selection plate. What could be the cause of this? Do you have any suggestions?

Here are possible reasons and solutions:

- Single-stranded (ss) oligonucleotides designed incorrectly; Make sure that each ss oligonucleotide contains the 5 nucleotides on the 3′ end required for cloning into the Invitrogen GeneArt CRISPR Nuclease Vector: ie., Top strand includes GTTTT on the 3′ end; Bottom strand includes CGGTG on the 3′ end.

- Double-stranded (ds) oligonucleotides were degraded; Store the 5 nM ds oligonucleotide stock in 1X Oligonucleotide Annealing Buffer. Avoid repeated freeze/thaw cycles; aliquot the 5 nM ds oligonucleotide stock and store at -20°C.

- Oligonucleotide annealing reaction inefficient; Ensure that the annealing reaction was performed as directed. If ambient temperature is >25°C, incubate the annealing reaction in a 25°C incubator.

Citations et références (1)

Citations et références
Abstract
Rapid and highly efficient mammalian cell engineering via Cas9 protein transfection.
Authors:Liang X, Potter J, Kumar S, Zou Y, Quintanilla R, Sridharan M, Carte J, Chen W, Roark N, Ranganathan S, Ravinder N, Chesnut JD,
Journal:
PubMed ID:26003884
'CRISPR-Cas9 systems provide a platform for high efficiency genome editing that are enabling innovative applications of mammalian cell engineering. However, the delivery of Cas9 and synthesis of guide RNA (gRNA) remain as steps that can limit overall efficiency and ease of use. Here we describe methods for rapid synthesis of ... More