Les dosages Click-iT Plus TUNEL Alexa Fluor 488, 594 et 647 pour la détection d’apoptose in situ peuvent détecter les cellules apoptotiques dans des échantillons de tissus et de cellules en culture grâce à l’incorporation d’une petite fraction de marquage hautement spécifique et d’un colorant fluorescent brillant. Après incorporation de la fraction de marquage dans les fragments d’ADN, la détection s’effectue au moyen d’une réaction “clic” catalysée à l’aide de conditions assez douces pour préserver le signal fluorescent émis des protéines vertes fluorescentes (GFP) ou protéines rouges fluorescentes (RFP).

Les autres avantages du dosage Click-iT Plus TUNEL pour la détection d’apoptose in situ sont les suivants :
• Optimisé pour la détection de cellules apoptotiques dans des échantillons de tissus ou de cellules
• Multiplexé — optimisé pour fonctionner avec des colorants fluorescents ou des protéines telles que les protéines vertes fluorescentes (GFP) et les protéines rouges fluorescentes (RFP)
• Dosage TUNEL amélioré — meilleure incorporation des marquages grâce à une petite fraction réactive
• Signal apoptotique brillant — utilise les colorants Alexa Fluor, ce qui fournit un signal fluorescent stable et non photoblanchissant
• Flexibilité — le dosage peut être configuré pour analyser entre 1 et 50 échantillons à la fois

La fragmentation de l’ADN cellulaire est une caractéristique de l’apoptose. Le dosage TUNEL est la méthode la plus employée pour détecter l’ADN fragmenté dans des échantillons de cellules apoptotiques ou de tissus. Le dosage TUNEL commence avec l’incorporation de dUTP modifié à l’extrémité 3’-OH de l’ADN fragmenté. La modification dUTP passe souvent par l’ajout d’un fluorophore. En raison de la taille du fluorophore, le dUTP modifié peut afficher des taux d’incorporation inférieurs aux prévisions, ce qui peut avoir une incidence sur la sensibilité du dosage TUNEL. En outre, de nombreux fluorophores utilisés dans les kits de dosages TUNEL actuellement disponibles souffrent de problèmes de photoblanchiment et de chevauchement spectral fluorescent, qui tous deux réduisent la sensibilité et la capacité de multiplexer le dosage.

Le dosage Click-iT Plus TUNEL a été développé pour résoudre ces problèmes. Le dosage utilise du dUTP modifié avec un groupe d’alcynes (un petit groupe fonctionnel bio-orthogonal) qui permet au nucléotide d’être plus facilement incorporé. Après incorporation, une réaction clic hautement spécifique entre le groupe des alcynes et un colorant fluorescent Alexa Fluor à l’azide de picolyle, ainsi qu’une détection ultérieure de ce colorant, résulte en un dosage sensible et spécifique pour la détection d’échantillons de cellules apoptotiques ou de tissus. Grâce à ses conditions de réaction douces, le dosage Click-iT Plus TUNEL permet le multiplexage avec des protéines ou des colorants fluorescents.

Le dosage Click-iT Plus TUNEL a été validé avec différents types de tissus fixés au formol et inclus en paraffine. Dans tous les cas, sa capacité de multiplexer avec des protéines et des colorants fluorescents a été conservée. En outre, la capacité de colorer l’actine à l’aide de la phalloïdine marquée par fluorescence a également été conservée.

Le dosage Click-iT Plus TUNEL contient tous les réactifs nécessaires à la détection des cellules apoptotiques dans des échantillons de tissus ou de cellules. Les réactifs fournis dans ce kit peuvent être utilisés pour analyser 50 échantillons et peuvent être configurés pour analyser entre 1 et 50 échantillons à la fois.