Le kit de détection IHC colorimétrique TUNEL Click-iT™ permet d’identifier les cellules apoptotiques dans les échantillons de tissus et de cellules cultivées au moyen d’une petite fraction de marquage hautement spécifique et d’une conjugaison de peroxydase à la streptavidine. Après l’incorporation de la fraction de marquage dans les sites de fragmentation d’ADN, la détection est réalisée par une réaction clic catalysée qui ajoute un groupe de biotine à ces sites. L’ajout ultérieur d’un substrat de streptavidine-peroxydase et de peroxydase entraîne un signal brun foncé qui peut être détecté par microscopie optique et stocké pour analyse ultérieure.

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• Optimisé pour la détection des cellules apoptotiques dans des échantillons de tissus ou de cellules
• Dosage TUNEL colorimétrique amélioré—meilleure incorporation des marquages grâce à une petite fraction réactive
• Sensibilité accrue—l’incorporation des marquages spécifique entraîne un fond inférieur et un signal plus brillant
• Résultats riches en contenu—la morphologie des cellules, l’environnement cellulaire et le signal apoptotique sont clairement visibles
• Flexibilité—le dosage peut être configuré pour 50 tests d’apoptose TUNEL indépendants

Les étapes suivantes de l’apoptose sont caractérisées par des changements dans la morphologie nucléaire, la condensation de la chromatine, la dégradation de l’enveloppe nucléaire et la fragmentation de l’ADN. Les dosages de marquage d’entaille des extrémités de la désoxyribonucléotidyl transférase terminale-dUTP (TUNEL) sont basés sur l’incorporation de dUTP modifiés par la désoxyribonucléotidyl transférase terminale (TdT) aux extrémités 3’-OH de l’ADN fragmenté. Les dosages colorimétriques TUNEL utilisent des dUTP conjugués à une fraction de biotine, suivis de l’ajout d’un conjugué de streptavidine-peroxydase et d’un substrat de peroxydase, ce qui entraîne un signal apoptotique brun foncé. Cependant, les dosages colorimétriques TUNEL sont sujets à un fond élevé, ce qui réduit la sensibilité et la spécificité du signal.

Le kit de détection IHC colorimétrique TUNEL Click-iT a été développé pour résoudre ces problèmes en utilisant un dUTP modifié avec un groupe d’alcynes (un petit groupe fonctionnel bio-orthogonal) qui permet d’incorporer le nucléotide plus facilement par TdT. Après incorporation, une réaction clic hautement spécifique lie par covalence l’azide de biotine et le groupe d’alcynes. De la streptavidine-peroxydase (péroxydase de raifort) puis du substrat de péroxydase (DAB) sont ajoutés, ce qui permet la détection colorimétrique des cellules apoptotiques. Le degré élevé de spécificité de marquage inhérent à la technologie clic entraîne un fond faible et une meilleure détection des cellules apoptotiques.

Le kit de détection IHC colorimétrique TUNEL Click-iT a été optimisé et contient tous les réactifs nécessaires à la détection des cellules apoptotiques à partir d’échantillons de tissus ou de cellules. Les réactifs fournis dans ce kit peuvent être utilisés pour analyser 50 échantillons et configurés pour analyser entre 1 et 50 échantillons à la fois.