La polynucléotide kinase T4 Thermo Scientific™ (PNK T4) catalyse le transfert du phosphate gamma de l’ATP au groupe 5’-OH d’ADN et d’ARN premier brin et double brin, d’oligonucléotides ou de 3’-monophosphates de nucléoside (réaction prospective). La réaction est réversible. En présence de l’ADP, la polynucléotide kinase T4 affiche une activité de 5’-phosphatase et catalyse l’échange des groupes de phosphate entre les 5’-P-oligo-polynucléotides et l’ATP (réaction d’échange). L’enzyme est également une phosphatase de 3’.

Points clés
• Actif dans l’enzyme de restriction Thermo Scientific, RT et les tampons de ligase d'ADN T4

Applications
• Marquage de l’extrémité 5' des acides nucléiques à utiliser comme :
    --sonde pour des hybridations
    --sonde pour les cartographies des transcrits
    --marqueur pour des électrophorèses sur gel
    --amorces pour le séquençage d'ADN
    -- Amorces pour le PCR
• Phosphorylation en 5 d’oligonucléotides, de produits de PCR et d’autres molécules d’ADN et d’ARN avant la ligation
• Phosphorylation d’amorces pour la PCR Détection de modifications de l’ADN par la méthode de post-marquage au ³²P (5, 6)
• Élimination des groupes phosphates en 3 (2)

Remarques
• Les extrémités 5 'des acides nucléiques peuvent être marquées soit par la réaction directe, soit par la réaction d'échange.
• Le polyéthylèneglycol (PEG) et la spermidine améliorent le débit et l’efficacité de la réaction de phosphorylation. Le PEG est utilisé dans le mélange de la réaction d’échange.
• Puisque la polynucléotide kinase T4 est inhibée par les ions d’ammoniac, utiliser l’acétate de sodium pour précipiter l’ADN avant la phosphorylation.