Le kit PureLink™ HiPure Plasmid FP Maxiprep (filtre et précipitateur) isole l’ADN plasmidique, de cellules pelletées à de l’ADN ultrapur, en moins d’une heure. À l’aide des colonnes de filtration HiPure et des précipitateurs HiPure fournis dans le kit, vous pouvez purifier l’ADN plasmidique sans aucune étape de centrifugation requise dans les protocoles d’isolement traditionnels. La qualité de l’ADN plasmidique purifié est équivalente à celle obtenue après deux passages à travers des gradients de chlorure de césium (la plus rigoureuse des méthodes de purification de l’ADN) ce qui la rend adaptée à la transfection et à d’autres applications nécessitant un ADN plasmidique de haute pureté. Le kit PureLink™ HiPure Plasmid FP Maxiprep (tableau 1) fournit les avantages suivants :
• Protocoles simples : clarification du lysat bactérien et précipitation d’isopropanol sans centrifugation
• Résultats rapides : de cellules E. coli pelletées à de l’ADN plasmidique de haute pureté, adapté à la transfection, en 60 minutes environ
• Rendement élevé : jusqu’à 850 µg à partir d’un nombre élevé de copies de plasmide

Fonctionnement
Le kit plasmidique Maxiprep FP PureLink™ HiPure s’appuie sur une méthode de lyse alcaline qui permet de rapidement préparer et éliminer les lysats bactériens sans étape de centrifugation (figure 1). La colonne de filtration HiPure comprend une cartouche de filtration du lysat, intégrée dans la colonne d’échange d’anions, qui permet de clarifier le lysat en une seule étape et de se lier à l’ADN plasmidique. Les impuretés telles que l’ARN, les protéines et d’autres contaminants sont éliminées en un seul nettoyage, tandis que l’ADN plasmidique ultrapur est élué avec un tampon à forte teneur en sel. Pour précipiter et dessaler l’ADN, il faut ajouter de l’isopropanol à l’ADN élué et ensuite, appliquer le mélanger au précipitateur HiPure à l’aide d’une grande seringue. Après l’étape de nettoyage et de séchage ultérieure, l’ADN plasmidique est facilement élué du précipitateur HiPure avec un tampon TE ou de l’eau. L’utilisation du précipitateur rend inutile toute centrifugation, réduit le risque de perte de pastille d’ADN lors de l’élimination du surnageant et permet d’économiser du temps. L’ADN résultant est prêt à être utilisé dans les applications les plus difficiles. L’ensemble du protocole : du stade de cellules E. coli à celui d’ADN plasmidique de qualité de transfection ultrapur : peut être complété en environ une heure.

Rendement le plus élevé et concentrations prêtes à l’emploi
Le précipitateur HiPure a été optimisé pour permettre aux volumes d’élution les plus faibles (jusqu’à 500 µl) de produire de l’ADN hautement concentré, sans diminution significative du rendement. En réalité, le rendement à des concentrations plus élevées est toujours plus élevé que les kits concurrents (figure 2). Le rendement et la concentration peuvent être ajustés pour répondre aux besoins de votre application en aval.