pBAD/TOPO™ ThioFusion™ Expression Kit

Citations et références (7)

Invitrogen™

pBAD/TOPO™ ThioFusion™ Expression Kit

Le kit d’expression pBAD / TOPO™ ThioFusion™ est conçu pour le clonage en une étape et l’expression régulée des protéinesAfficher plus

Référence	Quantité
K37001	20 réactions

Référence K37001

Prix (EUR)

1 368,00

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Quantité:

20 réactions

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Le kit d’expression pBAD / TOPO™ ThioFusion™ est conçu pour le clonage en une étape et l’expression régulée des protéines de fusion de thiorédoxine dans E. coli(Figure 1). Le vecteur pBAD / Thio-TOPO™ code la thiorédoxine His-Patch comme partenaire de fusion de l’extrémité N-terminale. La fusion de thiorédoxine peut augmenter significativement la solubilité de nombreuses protéines difficiles à exprimer et améliorer le rendement de la production de protéines. Le vecteur comprend les caractéristiques supplémentaires suivantes (Figure 2) :

• Le promoteur araBAD pour une expression étroitement régulée dans le vecteur activé par E. coli I pour un clonage TOPO™ en 5 minutes de produits PCR amplifiés par Taq
• Marqueur de polyhistidine d’extrémité C-terminale (6xHis) pour la purification à l’aide de résine de chélation de nickel et la détection à l’aide d’anticorps anti-His(C-term)
• Épitope V5 d’extrémité C-terminale pour une détection avec un anticorps anti-V5
• Site de clivage de l’entérokinase pour un clivage efficace du marqueur de fusion d’extrémité N-terminale avec l’entérokinase EKMax™

Usage exclusivement réservé à la recherche. Ne pas utiliser pour des procédures de diagnostic.

Spécifications

Résistance aux antibiotiques des bactériesAmpicilline (AmpR)

Souche bactérienne ou de levuresTOP10

ClivageSite de reconnaissance d’EK (entérokinase)

Système constitutif ou inductibleInductible

Mécanisme d’expressionExpression cellulaire

Système d’expressionE. coli

Agent d’inductionArabinose

Type de produitKit d’expression des lentivirus

Quantité20 réactions

Agent de sélection (eucaryotique)Néant

VecteurpBAD

Méthode de clonageTOPO™-TA

Gamme de produitsTOPO, ThioFusion

AccélérateuraraBAD

Marqueur de protéineMarqueur His (6x), marqueur d’épitope V5, thiorédoxine

Unit SizeEach

Contenu et stockage

Chaque kit d’expression pBAD / TOPO™ ThioFusion™ contient deux boîtes et le stab d’E. coli LMG194. La boîte d’expression pBAD / TOPO™ ThioFusion™ contient tous les réactifs nécessaires à la PCR (sauf la polymérase Taq), y compris les 200 ng de vecteur pBAD / Thio-TOPO™ activé par topoisomérase I, l’eau stérile, les dNTP, le tampon PCR 10X, la solution saline, les amorces et le modèle de contrôle, 20 % de L-arabinose, les amorces pour le séquençage ou l’analyse PCR et plasmide de contrôle d’expression. Stockage à -20°C. La boîte One Shot™ contient tous les réactifs nécessaires à la transformation, y compris 21 aliquotes de 50 µl à usage unique d’E. coli chimiquement compétentes TOP10, un milieu S.O.C. et un plasmide de contrôle superenroulé pUC19. Conserver la boîte One Shot™ à -80°C. Conserver le stab d’E. coli LMG194 à 2 - 8°C. La stabilité de tous les composants est garantie pendant 6 mois lorsque ceux-ci sont correctement stockés.

Foire aux questions (FAQ)

How much L-arabinose should I use to induce expression with the pBAD expression system?

While the amount of L-arabinose can vary depending on your expression experiment, we suggest performing a pilot expression experiment with varying amounts of L-arabinose from 0.00002% to 0.2%.

Should I use TOP10 cells or the LMG194 E. coli strain you offer for expression with my pBAD system?

Top10

Advantages:
- Saves time, can go directly from cloning to expression.
- The glycerol stock is more stable because these strains are endA- and recA-.

Disdvantages:
- This strain is not protease-deficient. Therefore, the protein may be degraded.

LMG194

Advantages:
- Grows well in minimal media, except M9.
-Have to transform the plasmid into the cells just for expression.
-RM medium with glucose to ensure low basal level of protein.

Disadvantages:
- Not protease-deficient. Therefore, the protein may be degraded.
- The glycerol stock may not be stable because this cell strain is not recA- or endA-.

What competent cells do you recommend I use for expression with my pBAD expression system?

We recommend using a competent cell strain that is araBADC- and araEFGH+, allowing transportation of L-arabinose, but not metabolizing it. This is important for expression studies, as the level of L-arabinose will be constant inside the cell and will not decrease over time. We offer our TOP10 competent cells, or our LMG194 E. coli strain.

Can you tell me the sequence of primers that can be used in pBAD vectors to sequence my gene of interest?

The pBAD vectors contain a forward and reverse pBAD primer flanking the gene of interest. The sequences are as follows:

pBAD forward primer: 5'-ATGCCATAGCATTTTTATCC-3'

pBAD reverse primer: 5'-GATTTAATCTGTATCAGG-3'

Do you have a list of the cap colors for the pBAD vectors?

Here are the cap colors:

- pBAD/His A: Red

- pBAD/His B: Orange

- pBAD/His C: Yellow

- pBAD/His LacZ: Green

- pBad/gIII A: Yellow

- pBad/gIII B: Green

- pBad/gIII C: Blue

- pBAD/gIII/calmodulin: Purple

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Citations et références (7)

Citations et références

Abstract

A protein kinase encoded by the t complex responder gene causes non-mendelian inheritance

Authors:BERNHARD G. HERRMANN, BIRGIT KOSCHORZ, KARIN WERTZ, K. JOHN MCLAUGHLIN* & ANDREAS KISPERT

Journal:Nature

PubMed ID:10647005

'Males heterozygous for the t-haplotype form of mouse chromosome 17 preferentially transmit the t-chromosome to their progeny. Several distorter/sterility loci carried on the t-haplotype together impair flagellar function in all spermatozoa whereas the responder, Tcr, rescues t-sperm but not wild-type sperm. Thus, t-sperm have anadvantage over wild-type sperm in fertilizing ... More

The cathepsin B of Toxoplasma gondii, toxopain-1, is critical for parasite invasion and rhoptry protein processing.

Authors: Que Xuchu; Ngo HuÃ¢n; Lawton Jeffrey; Gray Mary; Liu Qing; Engel Juan; Brinen Linda; Ghosh Partho; Joiner Keith A; Reed Sharon L;

Journal:J Biol Chem

PubMed ID:12000756

'Cysteine proteinases play a major role in invasion and intracellular survival of a number of pathogenic parasites. We cloned a single copy gene, tgcp1, from Toxoplasma gondii and refolded recombinant enzyme to yield active proteinase. Substrate specificity of the enzyme and homology modeling identified the proteinase as a cathepsin B. ... More

Bacterial cell killing mediated by topoisomerase I DNA cleavage activity.

Authors:Cheng B, Shukla S, Vasunilashorn S, Mukhopadhyay S, Tse-Dinh YC,

Journal:J Biol Chem

PubMed ID:16159875

'DNA topoisomerases are important clinical targets for antibacterial and anticancer therapy. At least one type IA DNA topoisomerase can be found in every bacterium, making it a logical target for antibacterial agents that can convert the enzyme into poison by trapping its covalent complex with DNA. However, it has not ... More

Degradation of corn fiber by Clostridium cellulovorans cellulases and hemicellulases and contribution of scaffolding protein CbpA.

Authors:Koukiekolo R, Cho HY, Kosugi A, Inui M, Yukawa H, Doi RH,

Journal:Appl Environ Microbiol

PubMed ID:16000754

'Clostridium cellulovorans, an anaerobic bacterium, degrades native substrates efficiently by producing an extracellular enzyme complex called the cellulosome. All cellulosomal enzyme subunits contain dockerin domains that can bind to hydrophobic domains termed cohesins which are repeated nine times in CbpA, the nonenzymatic scaffolding protein of C. cellulovorans cellulosomes. In this ... More

Factor B and the mitochondrial ATP synthase complex.

Authors: Belogrudov Grigory I; Hatefi Youssef;

Journal:J Biol Chem

PubMed ID:11744738

Factor B is a subunit of the mammalian ATP synthase complex, whose existence has been controversial. This paper describes the molecular and functional properties of a recombinant human factor B, which when added to bovine submitochondrial particles depleted of their factor B restores the energy coupling activity of the ATP ... More

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