Milieu de montage anti-atténuation en verre ProLong™

Le milieu de montage anti-atténuation ProLong Glass est un milieu de monteur à base de glycérol, durcissable, prêt à l’emploi, qui peut être appliqué directement sur les cellules marquées fluorescentes ou les échantillons de tissu sur les lames ou lamelles de microscope. Il est formulé sans coloration de l’ADN ou avec la coloration bleue de l'ADN NucBlue (Hoechst 33342) ou avec la coloration rouge profond de l’ADN SYTOX Deep Red. Le milieu de monteur en verre ProLong possède un indice de réfraction de 1,52 après le durcissement, similaire à celui des lamelles en verre, de l’huile d’immersion compatible et de l’optique de microscope à immersion dans l’huile, permettant une résolution et une sensibilité supérieures. Le milieu de monteur ProLong Glass est également conçu pour offrir une protection inégalée de la protection contre le photoblanchiment sur les spectres visibles et les infrarouges proches. Vous pouvez utiliser le milieu de monteur anti-atténuation ProLong en verre avec presque n’importe quel colorant fluorescent ou protéine fluorescente (par exemple, GFP, RFP, mCherry) et avec n’importe quel type de cellule/tissu pour des profondeurs d’image allant de 0 à 100 µm pour la pile Z haute résolution et les images 3D et 2D. Pour un milieu de montage non durcissant avec un indice de réfraction de 1,52, essayez le milieu de montage anti-atténuation SlowFade Glass Soft-set.

Avec son indice de réfraction élevé de 1,52 et sa formulation anti-atténuation supérieure, le milieu de montage anti-atténuation ProLong Glass offre les avantages suivants :
• Jusqu’à 75 % d’amélioration de la résolution axiale pour des images nettes
• 3–4 fois plus de profondeur focale imageable par rapport aux milieux de montage avec un indice de réfraction de 1,47, avec des images nettes pour les monocouches de cellules, les coupes tissulaires ou les cultures cellulaires 3D jusqu’à 150 μm d’épaisseur / profondeur focale
• Faible fond à travers le spectre
• Signaux conservés provenant du photoblanchiment inhibé
• Des semaines à des mois de stabilité pour les échantillons montés sur lames
• Facilité d’utilisation
• Disponibilité avec ou sans DAPI

En savoir plus sur le milieu de montage anti-atténuation ProLong >

Le milieu de montage anti-atténuation ProLong Glass Hard-Set est déjà mélangé et prêt à l’emploi dans un flacon compte-gouttes ou dans un flacon de 10 ml avec ou sans colorant d’ADN. NucBlue (Hoechst 33342) est excité par la lumière UV à 360 nm lorsqu'il est lié à l’ADN, avec une émission maximale à 460 nm, et est détecté à l’aide d’un filtre traditionnel DAPI. La coloration rouge profond SYTOX est excitée par la lumière rouge à 660 nm lorsqu’elle est liée à l’ADN, avec une émission maximale à 682 nm, et est détectée à l’aide d’un filtre traditionnel rouge profond / Cy5. Après avoir retiré l’excédent d’eau, il vous suffit d’appliquer une goutte de milieu de montage sur lʼéchantillon, dʼajouter une lamelle, de traiter et de prendre des images. Le milieu de montage ProLong Glass est un milieu de montage durci qui minimise la réfraction optique et l’aberration sphérique dans le trajet optique, permet le stockage à long terme de vos échantillons et aide à protéger vos échantillons contre le photoblanchiment. Le monteur en verre ProLong ne décolore pas ou ne rétrécit pas lorsqu’il est durci, ce qui permet de prendre des images fluorescentes de haute qualité semaines, voire des mois, après le montage des lames.

Le monteur anti-atténuation en verre ProLong avec la coloration NucBlue contient une concentration optimisée de la coloration Hoechst 33342, qui fournit un marquage nucléaire supérieur de la plupart des cellules et des tissus. Le milieu de montage ProLong Glass avec la coloration NucBlue n’est pas recommandé pour les échantillons plus épais que 30 µm. Les échantillons plus épais peuvent nécessiter des incubations plus longues avec des réactifs de marquage, une pré-incubation avec le réactif NucBlue Live ReadyProbes est donc recommandée.

Images les plus claires et les plus nettes
Les études montrent que la résolution axiale d’un système de microscopie peut être améliorée en faisant correspondre l’indice de réfraction du milieu de montage, ce qui maximise la collecte de la lumière de la lentille d’objectif (1–3). Fouquet et al. ont vu une amélioration spectaculaire de la résolution axiale tout en utilisant un microscope confocal avec un milieu à indice de réfraction élevé (3). Lorsque le milieu de montage anti-atténuation ProLong Glass, dont l’indice de réfraction est de 1,52, est comparé à un milieu de montage avec un indice de réfraction de 1,47, la résolution axiale est améliorée de 32 % à une profondeur focale de 40 µm et de 75 % à une profondeur focale de 100 µm (voir figure ci-dessous). L’intensité du signal et la sensibilité des fluorophores sont également améliorées à mesure que la profondeur focale augmente dans l’échantillon. La même amélioration ou une plus grande amélioration de la résolution et de la sensibilité est observée dans la direction latérale. Cela fait du Prolong Glass un milieu de montage excellent pour l’acquisition d’images Z-Stack, 3D et 2D de cellules et de tissus à des profondeurs allant de 0 à 100 µm (voir la figure ci-dessous).

Inhiber le photoblanchiment à travers les spectres visible et proche infrarouge
Quels que soient les colorants fluorescents ou les protéines fluorescentes que vous utilisez, le montage anti-atténuation ProLong Glass vous offre une protection supérieure contre le photoblanchiment. Il affiche les meilleures performances de sa catégorie avec un vaste éventail de colorants fluorescents, notamment les colorants Alexa Fluor, FITC, TRTC, Texas Red, Cy3 et Cy5 (voir la figure ci-dessous). Le milieu de montage anti-atténuation ProLong Glass n’absorbe pas les fluorophores et vous aide à obtenir des images haute résolution de la meilleure qualité à des fins de publication grâce à sa capacité à fournir un signal plus lumineux sans aucun fond.

Signaux stables pendant lʼimagerie et pour le stockage à plus long terme
Le milieu de montage anti-atténuation ProLong Glass est l’option pour lʼarchivage des échantillons et pour préserver lʼintensité du signal pendant les sessions dʼimagerie prolongées, par exemple lʼanalyse répétée dans des conditions dʼéclairage confocal à balayage laser ou avec une microscopie super résolution. Il est facile à utiliser—Il vous suffit d’éliminer l’excédent d’eau de l’échantillon coloré et de le monter.

Bénéficiez dʼune excellente correspondance de lʼindice de réfraction pour des images d’une netteté absolue.
Pour les applications dʼimagerie modernes à haute résolution, la correspondance de lʼindice de réfraction est primordiale. Le milieu de montage anti-atténuation ProLong Glass durcit jusqu’à un indice de réfraction de 1,52. En outre, cette propriété de durcissement élimine la nécessité d’utiliser des résines acryliques salissantes (tel le vernis à ongles), qui peuvent endommager ou détruire les objectifs de microscope moderne.

Références
1 : Cremer C, Masters BR. Resolution enhancement techniques in microscopy. Eur Phys J. 2013 38(3):281-344.
2: Shimi T, Kittisopikul M, Tran J, Goldman AE, Adam SA, Zheng Y, Jaqaman K, Goldman RD. Structural organization of nuclear lamins A, C, B1, and B2 revealed by superresolution microscopy. Mol Biol Cell. 2015 26(22):4075-86.
3: Fouquet C, Gilles JF, Heck N, Dos Santos M, Schwartzmann R, Cannaya V, Morel MP, Davidson RS, Trembleau A, Bolte S. Improving axial resolution in confocal microscopy with new high refractive index mounting media. PLoS One. 2015 10(3):e0121096.