Thermo Scientific pBR322 est l’un des vecteurs de clonage d’E. coli les plus couramment utilisés.

Points forts

• Isolés à partir de E. coli (dam+, dcm+)
• Plus de 90 % dans la forme superenroulée
• Purifié par chromatographie à l’aide de la technologie brevetée

Applications

• Clonage
• La préparation de l’étalon de poids moléculaire d’ADN

spBR322 a une longueur de 4361 bp et contient :
• Le réplicon rep responsable de la réplication du plasmide (plasmide – source pMB1)
• Le gène rop, codant pour la protéine Rop, qui favorise la conversion du complexe ARN I – ARN II instable en un complexe stable, et qui sert à diminuer le nombre de copies (plasmide – source pMB1)
• Le gène bla, codant pour la bêta-lactamase, qui confère une résistance à l’ampicilline (source – transposon Tn3)
• Le gène tet, codant la protéine de résistance à la tétracycline (source – plasmide pSC101)
• La séquence circulaire est numérotée de manière à ce que 1 soit le premier T de l’unique site GAATTC EcoRI et la numérotation augmente à travers le gène tet et le matériel pMB1 et enfin à travers la région Tn3.

La carte montre les enzymes qui coupent une fois l’ADN pBR322. Les enzymes produites par Thermo Scientific sont indiquées en orange. Les coordonnées font référence à la position du premier nucléotide dans chaque séquence de reconnaissance.
Les positions exactes des éléments génétiques sont indiquées sur la carte (codons de terminaison inclus). Les nucléotides 4153 à 4085 du gène bla (brin complémentaire) codent un peptide signal. La région rep indiquée est suffisante pour promouvoir la réplication. La réplication de l’ADN démarre en position 2 533 (± 1) et se poursuit dans la direction indiquée. Les plasmides porteurs des réplicons pMB1 et ColE1 sont incompatibles, mais ils sont entièrement compatibles avec ceux porteurs du réplicon p15A (pACYC177, pACYC184). Les plasmides dérivés de pMB1 peuvent être amplifiés à l’aide du chloramphénicol.