pUC18 DNA

Le vecteur pUC18 Thermo Scientific est un petit plasmide d’E. coli, en nombre de copies élevé, de 2 686 bp de long. Il contient un site de clonage multiple (MCS) identique au vecteur pUC19, sauf qu’il est disposé dans une orientation opposée.

Points clés

• Purifié par chromatographie à l’aide d’une technologie exclusive brevetée
• Plus de 90 % dans la forme superenroulée
• Isolé de la souche E.coli (dam+, dcm+)
• Pour la séquence d’ADN pUC18, la séquence d’ADN pUC19, l’analyse de séquence et la création d’une carte, reportez-vous à l’l’outil en ligne gratuit REviewer.

Applications

• Clonage
• Séquençage de l’ADN d’insert, ADN pUC18 : Préparation des étalons de poids moléculaire de l’ADN

Contenus des plasmides pUC18 / 19 et notes d’utilisation des plasmides - les plasmides pUC18 / 19 contiennent :
• Le réplicon pMB1 rep responsable de la réplication du plasmide (source – plasmide pBR322). Le nombre élevé de copies de plasmides pUC est le résultat de l’absence du gène rop et d’une mutation en un seul point dans le réplicon rep de pMB1.
• Le gène bla, codant la bêta-lactamase, confère une résistance à l’ampicilline (source – plasmide pBR322). Elle diffère de celle de pBR322 par des mutations en deux points  :
• La région de l’opéron E.coli lac contenant un site de liaison protéique CAP, promoteur P_lac, le site de liaison du répresseur lac et la partie 5’-terminale du gène lacZ codant le fragment N-terminal de la bêta-galactosidase (source – M13mp18/19). Ce fragment, dont la synthèse peut être induite par IPTG, est capable d’une complémentation intra-allélique (alpha) avec une forme défectueuse de bêta-galactosidase codée par l’hôte (mutation delta(lacZ)M15). En présence de l’IPTG, les bactéries synthétisent les deux fragments de l’enzyme et forment des colonies bleues sur des milieux avec du X-Gal. L’insertion de l’ADN dans le MCS situé dans le gène lacZ (les codons 6-7 du lacZ sont remplacés par le MCS) désactive le fragment N-terminal de la bêta-galactosidase et supprime la complémentation alpha. Les bactéries porteuses de plasmides recombinants donnent donc lieu à des colonies blanches.

La carte montre des enzymes qui coupent l’ADN pUC18 une fois. Les enzymes produites par Thermo Scientific sont indiquées en orange. Les coordonnées font référence à la position du premier nucléotide dans chaque séquence de reconnaissance.

Les positions exactes des éléments génétiques sont indiquées sur la carte (codons de terminaison inclus). Les nucléotides 2486 à 2418 du gène bla (brin complémentaire) codent un peptide signal. Le polypeptide LacZ correspondant à la bêta-galactosidase wt et essentiel pour la sélection bleu / blanc se termine à la position nt 236 (brin complémentaire). 30 autres codons dans le même cadre de lecture sont dérivés de pBR322. La région rep indiquée est suffisante pour promouvoir la réplication. La réplication de l’ADN démarre en position 866 (± 1) et se poursuit dans la direction indiquée. Les plasmides porteurs des réplicons pMB1 et ColE1 sont incompatibles, mais ils sont entièrement compatibles avec ceux porteurs du réplicon p15A (pACYC177, pACYC184). Les plasmides dérivés de pMB1 peuvent être amplifiés à l’aide du chloramphénicol.

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