EZ-Link™ Amine-PEG4-Desthiobiotin, No-Weigh™ Format

La amina-PEG4-destiobiotina Thermo Scientific EZ-Link es un compuesto de aminas pegiladas cuyo grupo similar a la biotina es eluíble a partir de la estreptavidina, lo que lo hace ideal para la conjugación de carbodiimida (EDC) a carboxilatos para el etiquetado y la purificación.

Características del formato EZ-Link amina-PEG4-Destiobiotina No-Weigh:

• Destiobiotina: como análogo de la biotina, permite una fácil elución a partir de la estreptavidina, una característica ideal para aplicaciones de purificación por afinidad
• Activado por aminas: la amina primaria puede entrecruzarse con proteínas y superficies de materiales utilizando EDC y otros entrecruzadores
• Pegilado: grupos de polietilenglicol (PEG) en el agente separador mejoran la solubilidad en agua de moléculas biotiniladas

Este compuesto de destiobiotina es un análogo de la biotina modificado por la amina que contiene un agente separador  polietilenglicol (PEG) de cuatro unidades. La destiobiotinilación se logra conjugando la amina primaria a grupos de carboxilo en materiales de superficie, péptidos o proteínas utilizando el entrecruzador de carbodiimida  EDC (n.º de referencia 22980). EDC activa los grupos carboxilo para unirse al grupo –NH2 de la amino-biotina, formando un enlace de amida. La etiqueta de la destiobiotina se une a la estreptavidina y a otras proteínas de unión a la biotina con alta especificidad, pero se eluye fácilmente con condiciones leves (es decir, por desplazamiento competitivo con biotina regular y libre). Como tal, este reactivo es una alternativa útil a la amina-PEG3-biotina (n.° de referencia 21347) para las técnicas de avidina-biotina en las que se desea obtener la elución no condenaturante de las proteínas etiquetadas. El formato sin peso (5 x 1 mg de viales resellables) elimina las dificultades asociadas de pesar pequeñas cantidades de reactivo y maximiza la protección del reactivo no utilizado contra la degradación.

Destiobiotina vs. biotina
La destiobiotina es un análogo de la biotina sin azufre de un solo anillo que se une a la estreptavidina con una especificidad casi igual, pero menos afinidad que la biotina (1/KD = 10^11 vs. 10^15 m, respectivamente)[1-2]. En consecuencia, las proteínas de cebo destiobiotiniladas y sus elementos de interacción pueden eludirse fácilmente y específicamente a partir de la resina de afinidad de estreptavidina utilizando condiciones leves basadas en el desplazamiento competitivo con biotina libre. Para experimentos de ensayos de precipitación con muestras biológicas, esta característica de liberación suave de la destiobiotina también ayuda a minimizar la copurificación de moléculas endógenas biotiniladas, que permanecen ligadas a la estreptavidina tras la elución de los complejos proteicos diana con biotina libre. El sistema modificado de afinidad de la avidina-biotina también elimina la necesidad de utilizar condiciones de elución severas que podrían desasociar complejos o dañar la proteína o célula diana. Las técnicas basadas en la destiobiotina son ideales cuando se utilizan proteínas nativas o recombinantes que no se expresan con una etiqueta de fusión y cuando se aíslan proteínas capturadas en condiciones nativas, como la focalización de células intactas o proteínas de superficie celular.

Etiquetado con compuestos de amina
Los compuestos de amina pueden conjugarse a grupos funcionales de proteínas y otras moléculas de diversas maneras. El método más común es el entrecruzamiento de la amina primaria terminal con los grupos de carboxilo utilizando . Los grupos de carboxilo (-COOH) se presentan en los residuos de aspartato o glutamato y en el terminal carboxílico de polipéptidos. Cuando se activa con EDC (n.° de pieza 22980), los carboxilatos reaccionan con grupos amino (–NH2) para formar enlaces de amida. Las moléculas de carboxilato y los materiales de superficie se pueden activar previamente usando EDC con Sulfo-NHS (n.° de pieza 24510) para la reacción posterior a las aminas primarias (ver química del éster NHS).