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ARN guides pour CRISPR-Cas9 |
ARNg de haute qualité pour CRISPR-Cas9 et les applications de criblage
Lors de l’utilisation du système CRISPR-Cas9 pour supprimer l’expression d’un gène ou pour activer une mutation spécifique, la conception, la production et la livraison d’ARN guides (ARNg) de haute qualité sont essentielles pour réussir. Que vous ayez besoin d’ARNg prêts à la transfection pour une utilisation avec les protéines TrueCut Cas9 ou que vous ayez besoin d’exploiter un lentivirus pour délivrer vos outils de modification aux cellules primaires ou difficiles à transfecter, nous avons ce qu’il vous faut. Utilisez notre outil de recherche de gènes d’ARNg pour trouver des ARNg préconçus dans l’un ou l’autre de ces formats ou consultez notre guide de sélection ci-dessous pour d’autres choix.
Pour le criblage de génomique fonctionnelle, nous avons également conditionné nos conceptions avancées d’ARNg dans des bibliothèques CRISPR pour le criblage à haut débit en réseau ou le criblage groupé économique.
Choisissez parmi différents formats d’ARNg CRISPR
Découvrez des outils rapides pour rechercher et commander des ARNg
En savoir plus sur les ARNg synthétiques TrueGuide
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En savoir plus sur les ARNg IVT
Guide de sélection des formats d’ARNg CRISPR
 ARNg synthétique TrueGuide |  Lentivirus à ARNg LentiArray |  Kit de synthèse d’ARNg Precision | |
| Aperçu |
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| Format | Oligo-ARN synthétique, chimiquement modifié pour la stabilité | Particules lentivirales | ARNm transcrit in vitro (IVT) |
| Application | Knock-out (préconçu) ou knock-in (sur mesure) | Knock-out, y compris criblage de bibliothèque | Knock-out ou knock-in |
| Espèces |
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| Méthode de délivrance | Transfection ou électroporation médiée par les lipides | Transduction lentivirale | Transfection ou électroporation médiée par les lipides |
| Format recommandé Cas9 | Protéines TrueCut Cas9 | Lentivirus LentiArray Cas9 | Protéines TrueCut Cas9 |
| Contrôles | Contrôles positifs et négatifs disponibles | Contrôles positifs et négatifs disponibles | |
| Commander maintenant | Commander maintenant | Commander maintenant |
Outils rapides pour rechercher et commander des ARNg
Recherchez les ARNsg CRISPR synthétiques ou lentiviraux préconçus
Les ARNg synthétiques TrueGuide sont des ARN de guidage simples CRISPR prêts à transfecter (ARNsg) conçus pour fournir un knock-out spécifique et à haute efficacité de votre gène cible. Si vous avez besoin d’enrichir les cellules modifiées, si vous travaillez avec des cellules difficiles à transfecter ou si vous avez besoin d’une expression à long terme de l’ARNsg, utilisez nos ARNg LentiArray CRISPR.
Trouvez des ARNg TrueGuide préconçus à l’aide de notre outil de recherche de gènes
Trouvez les ARNg CRISPR LentiArray préconçus à l’aide de notre outil de sélection
Commandez un ARNg synthétique personnalisé
Vous avez votre propre conception ? Que ce soit à partir d’un article de journal, d’un collègue ou de votre outil de conception préféré, utilisez notre interface simple et rapide pour télécharger les séquences d’ARNg personnalisées que vous souhaitez synthétiser dans un ARNg TrueGuide personnalisé.
Utilisez notre outil de conception pour créer une expérience de modification génétique et commandez vos ARNg
Besoin d’aide à la conception pour créer une lignée cellulaire conçue ? Vous pouvez concevoir votre expérience de knock-out, de knock-in ou de marquage de gènes CRISPR, et commander un ensemble complet de réactifs (y compris les ARNg) pour cela, grâce à notre logiciel gratuit TrueDesign Genome Editor.
Contactez-nous pour les ARN de guidage au format plaque ou d’autres commandes spéciales
Pour commander plus de 24 ARNg pour une livraison sur une plaque à 96 puits ou pour des ARNg à utiliser avec d’autres nucléases ou des séquences d’échafaudage spécifiques, veuillez nous contacter à l’adresse GEMservices@thermofisher.com.
ARNg synthétique TrueGuide pour CRISPR
Les ARNg synthétiques Invitrogen TrueGuide sont des ARN de guide CRISPR prêts à la transfection conçus par un algorithme exclusif pour une modification haute efficacité. Ces ARN guides uniques préconçus et garantis offrent une élimination ciblée avec une grande spécificité dans les génomes humains et murins.
ARNm synthétique modifié en 1 pièce TrueGuide | |
| Knock-outs préconçus pour la souris et les cellules humaines | |
| Séquences personnalisées | |
| Contrôles validés disponibles | |
| Disponible en format plaque | |
| Prêt à la transfection | |
| Modifications chimiques* | |
| Idéal pour les cellules primaires et les cellules souches |
*Les modifications chimiques comprennent les analogues 2’O-méthyl et les liaisons phosphorothioate pour accroître l’efficacité de la modification et protéger contre la dégradation par les nucléases.
Données : Modification haute efficacité avec les ARNg synthétiques TrueGuide
Figure 1. Clivage robuste des gènes kinase avec les ARNg synthétiques TrueGuide dans les cellules ME-180 exprimant Cas9. L’efficacité moyenne des clivages était >de 60 %.
Données : Les ARNg synthétiques TrueGuide contribuent à maintenir la viabilité cellulaire
Figure 2. Les ARNg synthétiques TrueGuide délivrés avec des protocoles optimisés provoquent une toxicité cellulaire minimale. La Lipofectamine CRISPRMAX a été utilisée pour complexer et délivrer la protéine TrueCut Cas9 v2 et les ARNg synthétiques TrueGuide spécifiques à la cible dans deux lignées cellulaires cancéreuses en utilisant nos protocoles de transfection recommandés. Sur les trois loci, deux (PRKCG-T1 et CMPK1-T1) étaient connus pour être difficiles à modifier. La viabilité cellulaire a été mesurée à l’aide de PrestoBlue. Les données ont montré que la transfection entraînait une toxicité minimale, la viabilité cellulaire globale étant maintenue à près de 100 %.
ARN guides synthétiques TrueGuide : foire aux questions (FAQ)
L’ARNg, ou ARN guide, fait partie du système CRISPR-Cas9. La molécule d’ARNg comporte deux composants : un ARN CRISPR spécifique à la cible (ARNcr) et un ARNcr auxiliaire de trans-activation (ARNtracr). L’ARNg guide la protéine Cas9 vers un locus génomique spécifique via un couplage de bases entre la séquence 20-mer de l’ARNcr et la séquence génomique cible.
ARNsg est l’abréviation d’ARN “single guide”, par opposition au système CRISPR-Cas9 natif et conventionnel de S. pyogenes qui utilise un guide en deux parties dans lequel l’ARN CRISPR (ARNcr) est hybridé avec un ARNtracr. Un ARNsg combine les deux ARN en un seul ARN long. Les ARNsg ont généralement une longueur de 100 nt et peuvent être exprimés à partir d’un vecteur ou d’une synthèse chimique.
L’ARNsg modifié ayant démontré une efficacité supérieure pour davantage de types de cellules que le système en deux parties, le format de produit ARN TrueGuide en deux parties ARNcr:ARNtracr a été abandonné. Cela nous a permis de simplifier notre offre d’ARNg synthétique et de nous concentrer sur l’ARNsg modifié.
Les ARNg CRISPR sont disponibles auprès de Thermo Fisher Scientific sous forme d’oligos ARN synthétisés chimiquement, de particules lentivirales conditionnées ou générées sous forme d’ARNg transcrits in vitro (IVT) à l’aide du kit de synthèse d’ARNg GeneArt Precision.
Les modifications chimiques comprennent des analogues 2’O-méthyl et des liaisons internucléotidiques phosphorothioate aux extrémités 5’ et 3’ de la molécule. Ces modifications améliorent l’efficacité de la modification en augmentant la liaison au site cible et en inhibant la dégradation par les nucléases, respectivement.
Vous pouvez acheter un ARNsg sans aucune modification chimique à l’aide de l’outil de commande d’ARNg sur mesure.
L’ARNg synthétique TrueGuide, lorsqu’il est transfecté avec la protéine TrueCut Cas9, offre une efficacité de modification maximale sur de larges types de cellules tout en minimisant la toxicité cellulaire et les réponses immunitaires innées. Contrairement à un système plasmidique, le système RNP est transitoire avec un renouvellement plus rapide, ce qui minimise les intégrations aléatoires et les effets hors cible.
Les séquences d’ARNg synthétiques TrueGuide sont analysées par spectrométrie de masse pour vérifier l’intégrité des séquences.
Pour estimer l’efficacité de la modification médiée par CRISPR/Cas9 dans une population cellulaire regroupée, vous pouvez utiliser le kit de détection de clivage génomique GeneArt, le séquençage de nouvelle génération (NGS) ou le séquençage de Sanger. L’une ou l’autre des méthodes de séquençage, le séquençage NGS des amplicons des populations soumises à la modification ou le séquençage Sanger des amplicons clonés dans des plasmides, donne une estimation plus précise du pourcentage d’efficacité de la modification et des types d’indels. Reportez-vous à la page Outils de validation TALEN et CRISPR pour une description plus approfondie de ces méthodes et au Guide de l’utilisateur de l’ARNg synthétique TrueGuide pour obtenir des conseils sur les protocoles.
ARNg lentiviral LentiArray pour le criblage et la modification de lignées cellulaires difficiles à transfecter
Les ARNg Invitrogen LentiArray CRISPR sont des lentivirus à ARNg pré-conçus et préemballés, conçus pour un knock-out efficace des gènes. Les conceptions d’ARNg LentiArray CRISPR ont été créées à l’aide d’un algorithme propriétaire de conception d’ARNg et sont optimisées pour une efficacité de knock-out maximale sans compromettre la spécificité.
Les ARNg LentiArray CRISPR sont disponibles pour soutenir le développement de tests de pré-criblage et la validation des résultats de post-criblage lors d’expériences de criblage à haut débit avec les bibliothèques CRISPR LentiArray. L’ARNg CRISPR LentiArray doit être utilisé avec le Lentivirus Cas9 LentiArray pour réaliser des expériences de modification génomique dans des lignées cellulaires ou des cellules primaires difficiles à transfecter.
Données : Knock-out réussi de l’EGFP avec l’ARNg LentiArray
Figure 3. Knock-out de l’EGFP médié par CRISPR-Cas9 avec l’ARNg LentiArray.(A) Les cellules A431 ont été soumises au knock-out de l’EGFR (colonne de droite) à l’aide du Lentivirus LentiArray Cas9 et de l’ARNg LentiArray CRISPR, puis comparées à des cellules non traitées (type sauvage, colonne de gauche) et à des cellules traitées avec Cas9 mais sans ARNg (contrôle Cas9, colonne du milieu). Les cellules ont été colorées pour l’expression de l’EGFR (vert), les noyaux (bleu) et la F-actine cytosquelettique (rouge) et analysées par immunofluorescence. La perte d’expression de l’EGFR n’a été observée que dans les cellules de knock-out de l’EGFR (c, f). (B) La réduction du signal EGFR a également été observée par transfert Western de la protéine cible dans les cellules de knock-out de l’EGFR par rapport aux contrôles.
ARNg IVT pour une génération rapide de conceptions sur mesure
Le kit de synthèse ARNg GeneArt Precision est un système complet pour la synthèse rapide de l’ARN guide (ARNg).
Avec ce kit, deux oligos courts et simple brin qui codent pour la séquence cible servent de produit de départ, et le modèle d’ARNg est assemblé à partir de ces oligos avec un promoteur T7 dans une courte réaction PCR “one-pot”. Ensuite, le produit assemblé est utilisé comme modèle dans une réaction de transcription in vitro (IVT). Une étape ultérieure de purification rapide permet d’obtenir un ARNg à haut rendement (>10 µg), à haute concentration (>200 ng/µl) et prêt à la transfection, en quatre heures seulement.
L’association de l’ARNg IVT avec notre protéine Cas9 TrueCut v2, a été testée sur diverses lignées cellulaires en suspension et adhérentes avec une efficacité de clivage de >70 % et aucune indication de toxicité.
L’ARNg résultant peut également être co-transfecté avec notre ARNm de nucléase CRISPR prêt à la transfection. Les formats de protéine et d’ARNm Cas9 ne nécessitent aucune manipulation plasmidique et sont compatibles avec des approches d’ingénierie cellulaire à haut débit et multiplexées à l’échelle du génome.
Commandez le kit de synthèse d’ARNg IVT
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