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FastDigest Restriktionsenzyme – Thermo Scientific
Ein Puffer für 176 Enzyme. Ganz einfach.
Thermo Scientific FastDigest Restriktionsenzyme sind eine fortschrittliche Generation an Enzymen, die einen schnellen und vollständigen DNA-Verdau in einem einzigen Universalpuffer ermöglicht. Dank unserer mehr als 30 Jahre Erfahrung in der Restriktionsenzymforschung und mit 176 Spezifitäten zählen unsere FastDigest Enzyme zu den beliebtesten Kundenlösungen unter den Formulierungen zum direkten Auftragen von Reaktionsgemischen auf Gele.
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Weitere Informationen zu Testgrößen – FastDigest Vorteilspack
Das Ergebnis von mehr als 40 Jahren Erfahrung
Mit der FastDigest Sammlung haben Sie Zugriff auf eine der umfangreichsten Restriktionsenzymsammlungen der Branche. Jahrzehntelange Erfahrung in der Enzymologie, die große Auswahl an Isoschizomeren und die Fähigkeit, in unseren hochmodernen Produktionsstätten außergewöhnlich reine Enzyme zu produzieren – all diese Faktoren sind in die Entwicklung des ersten vereinfachten Restriktionsenzymsystems mit Universalpuffer eingeflossen.
Vorteile von FastDigest Restriktionsenzymen
| FastDigest Restriktionsenzyme | Herkömmliche Restriktionsenzyme | |
|---|---|---|
| Puffersystem | Ein Universalpuffer | Bis zu 20 Puffer |
| Doppelter/mehrfacher Restriktionsverdau | Unbegrenzt – alle 176 Enzyme sind in einem Puffer zu 100 % aktiv | Begrenzt durch die Pufferkompatibilität |
| Reaktionszeit | 5 bis 15 Minuten | 1 Stunde bis über Nacht |
| Direktes Auftragen auf Gele möglich | Ja | Nein |
| Folgeanwendungen | 100 % Pufferkompatibilität | Partielle Kompatibilität |
| Star-Aktivität | Nein | Ja |
| Definition der Aktivität | 1 µL FastDigest Enzym spaltet im FastDigest Puffer in 5 bis 15 Minuten 1 µL Substrat-DNA | 1 Enzymeinheit hydrolisiert in einem optimalen Enzympuffer in 60 Minuten 1 µg Lambda-DNA |
100 % Aktivität in einem einzigen Puffer
FastDigest Green Puffer und Thermo Scientific FastDigest Puffer sind firmeneigene Verdaupuffer für 100 % Aktivität aller FastDigest Restriktionsenzyme. Dieses System ermöglicht doppelten und mehrfachen Verdau mit einer beliebigen Enzymkombination. Es sequenzieller Verdau oder Pufferänderungen sind nicht erforderlich.
Ein-, zwei- und dreifacher Verdau in fünf Minuten mit FastDigest Green Puffer
Plasmid-DNA-Verdau in fünf Minuten mit:
- Spur M: Thermo Scientific GeneRuler Express Leiter (Kat.-Nr. SM1553)
- Spur 1: Kontrolle, unverdaute Plasmid-DNA
- Spur 2: FastDigest EcoRI
- Spur 3: FastDigest EcoRI und FastDigest KpnI
- Spur 4: FastDigest EcoRI, FastDigest KpnI und FastDigest SmaI
100 % Pufferkompatibilität mit Folgeanwendungen
DNA-/RNA-modifizierende Enzyme wie Ligasen, Phosphatasen, Kinasen und mesophile DNA-Polymerasen sind in FastDigest und FastDigest Green Puffer zu 100 % aktiv. Aus diesem Grund können Enzyme für Folgeanwendungen dem FastDigest Reaktionsgemisch direkt hinzugefügt werden. Es sind keinerlei Pufferänderungen oder Reinigungsschritte erforderlich.
| DNA-/RNA-modifizierende Enzyme | Aktivität in FastDigest Green Puffer/FastDigest Puffer |
|---|---|
| DNA-Polymerase I, E. coli | 100 % |
| Klenow-Fragment | 100 % |
| Klenow-Fragment, exo- | 100 % |
| T4 DNA-Polymerase | 100 % |
| T7 DNA-Polymerase | 100 % |
| T4 DNA-Ligase* | 75 – 100 % |
| FastAP Wärmeempfindliche alkalische Phosphatase | 100 % |
| T4 Polynukleotid-Kinase | 100 % |
* Für die T4-DNA-Ligase-Aktivität sind 0,5 mM ATP erforderlich.
Vollständiger Verdau in 5 bis 15 Minuten
Doppelter und mehrfacher Verdau in 5 bis 15 Minuten in einem Puffer:
- Spart Zeit und Aufwand und erhöht den Durchsatz.
- Es liegen für alle Arten von DNA-Matrizen (Plasmid-DNA, PCR-Produkt, genomische DNA) Verdauzeiten vor.
- Für Matrizen ist kein Verdau über Nacht erforderlich.
- Star-Aktivität wird durch kurze Reaktionszeiten vermieden.
| Herkömmliche Restriktionsenzyme Sequenzieller Verdau | FastDigest Restriktionsenzyme Gemisch für eine Reaktion | ||
|---|---|---|---|
| Reaktionsvorbereitung für Apal | ~2 min | Reaktionsvorbereitung mit FastDigest ApaI und XhoI | ~2 min |
| Inkubation | 60 min | Inkubation | 5 min |
| Reaktionsvorbereitung für Xhol | ~2 min | — | — |
| Inkubation | 60 min | — | — |
| GESAMTZEIT | > 2 Stunden | GESAMTZEIT | 7 min |
Zur Verbesserung der Anwenderfreundlichkeit haben wir den FastDigest Green Puffer entwickelt, der die gleiche Leistungsfähigkeit wie der farblose FastDigest Puffer besitzt, jedoch auch das direkte Auftragen des Reaktionsgemisches auf Gele ermöglicht. 10X FastDigest Green Puffer enthält ein Dichtereagenz und zwei Farbmarker zum direkten Auftragen. Der blaue Farbstoff wandert mit DNA-Fragmenten des Größenbereichs 3 bis 5 kb in einem 1%igen Agarose-Gel und hat einen Anregungspeak von 424 nm. Der gelbe Farbstoff wandert schneller als 10 bp große DNA-Fragmente in einem 1%igen Agarose-Gel und hat einen Anregungspeak von 615 nm.
FastDigest Green Puffer
Reaktionsgemisch mit FastDigest Green Puffer:
- Spur 1: In Gel-Well gefüllt, vor der Elektrophorese
- Spur 2: Getrennt, nach der Elektrophorese
Kurze Protokollzeiten ohne Star-Aktivität
FastDigest Enzyme in Kombination mit FastDigest (Green) Puffer wurden entwickelt, um Star-Aktivität zu vermeiden:
- Kurze Inkubationszeit (5 bis 15 min), kein längerer Verdau erforderlich.
- Universalpuffer mit optimalem pH-Wert und optimaler Salzkonzentration für alle Enzyme.
- Optimale Enzym- und Glycerinkonzentrationen.
Herkömmliche Restriktionsenzyme können durch längere Inkubationszeiten, hohe Enzym- und/oder Glycerinkonzentration, hohe pH-Werte oder niedrige Ionenstärke eine Star-Aktivität oder eine relaxierte Aktivität aufweisen. Durch die Lösung all dieser Probleme ermöglichen FastDigest Enzyme in 5 Minuten einen einfachen, doppelten und sogar dreifachen Verdau ohne Anzeichen von Star-Aktivität.
Fünfminütiger Einzel- und Doppelverdau von Plasmid-DNA ohne Anzeichen von Star-Aktivität
Plasmid-DNA-Verdau in fünf Minuten mit:
- Spur 1: FastDigest SmaI
- Spur 2: FastDigest EcoRI
- Spur 3: FastDigest SmaI und FastDigest EcoRI Doppelverdau
- Spur M: GeneRuler 1 kb Plus DNA-Leiter (Kat.-Nr. SM1333)
- Spur C: Kontrolle, unverdaute Plasmid-DNA
Literatur
Ressourcen
Support
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.