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NativePAGE™ Bis-Tris Mini Protein Gels, 3 to 12%, 1.0 mm
Invitrogen™

NativePAGE™ Bis-Tris Mini Protein Gels, 3 to 12%, 1.0 mm

Le système de gel Bis-Tris Invitrogen NativePAGE est un système de mini-gel préfabriqué en polyacrylamide qui fournit une analyse sensible et à haute résolution des protéines et des complexes protéiques natifs pour les estimations de masse moléculaire et l’évaluation de la pureté.
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RéférencePuits
BN1001BOX10 puits
BN1003BOX15 puits
Référence BN1001BOX
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Le système de gel Bis-Tris Invitrogen NativePAGE est un système de mini-gel préfabriqué en polyacrylamide qui fournit une analyse sensible et à haute résolution des protéines et des complexes protéiques natifs pour les estimations de masse moléculaire et l’évaluation de la pureté. Il est basé sur la technique d’électrophorèse sur gel de polyacrylamide bleu en conditions natives (BN PAGE) mise au point par Schägger et von Jagow, qui surmonte les limites de l’électrophorèse native classique en offrant un pH de fonctionnement proche de la neutralité et une compatibilité avec les détergents.

Caractéristiques du système sur gel NativePAGE Bis-Tris :
Large éventail de poids moléculaire de 15 à 10 000 kDa
Séparation du pH neutre qui préserve mieux l’état natif des complexes protéiques
Résolution de toutes les protéines présentes dans le gel, quel que soit leur point isoélectrique (pHi)
Possibilité d’analyser les complexes de protéines membranaires dans leurs conformations natives
Possibilité d’obtenir une meilleure résolution qu’avec l’électrophorèse native traditionnelle Tris-Glycine

Fonctionnement des gels Bis-Tris NativePAGE
Dans SDS-PAGE, le SDS fonctionne comme une molécule à déplacement de charge qui dénature les protéines en leur conférant une charge nette négative et permet aux protéines de migrer vers l’anode. Le système BN PAGE utilise la molécule Coomassie G-250 pour déplacer les charges, celle-ci se lie aux protéines et leur confère une charge négative sans les dénaturer. Le pH, proche de la neutralité, du système sur gel NativePAGE Bis-Tris stabilise au maximum les protéines et la matrice gélifiée, offrant une méthode très sensible d’analyse des complexes de protéines membranaires et une résolution des bandes supérieure aux systèmes sur gel tris-glycine classiques.

Pour le transfert de protéines vers une membrane, nous vous recommandons d’utiliser les tampons de transfert NuPAGE pour le transfert humide traditionnel et les membranes en PVDF. Le tampon de transfert NuPAGE maintient l’environnement à pH neutre établi lors de l’électrophorèse. Les membranes en nitrate de cellulose ne sont pas utilisables à des fins de transfert car elles lient le colorant Coomassie G-250 très étroitement. Le transfert semi-sec rapide peut également être effectué avec le buvard d’alimentation Invitrogen (PB0013) ou le transfert sec rapide avec le dispositif de transfert de gel iBlot 2 (IB21001) à l’aide de membranes en PVDF.

Usage exclusivement réservé à la recherche. Ne pas utiliser pour des procédures de diagnostic.
Spécifications
À utiliser avec (équipement)minicellule XCell SureLock
Gel Thickness1,0 mm
Longueur (métrique)8 cm
Mode de séparationPoids moléculaire
Quantité10 gels/boîte
Applications recommandéesNatif
Volume de chargement des échantillonsJusqu’à 25 µl
Durée de conservation12 mois
Conditions d’expéditionGlace humide
Conditions de stockageÀ stocker entre 2° et 8°C. Ne pas congeler.
Largeur (métrique)8 cm
Pourcentage de gel3 à 12 %
Dimensions de gelMini
Type de gelBis-Tris
Gamme de produitsNativePAGE
Plage de séparation30 à 10 000 kDa
Type de séparationNatif
Puits10 puits
Unit SizeEach

Foire aux questions (FAQ)

What gels can I use to separate native proteins?

The NativePAGE Invitrogen Bis-Tris Gel System is a pre-cast polyacrylamide mini gel system that provides a sensitive and high-resolution method for analyzing native membrane protein complexes, native soluble proteins, molecular mass estimations, and assessing purity of native proteins. It is based on the blue native polyacrylamide gel electrophoresis technique (BN PAGE) developed by Schagger and von Jagow.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Protein Electrophoresis and Western Blotting Support Center.

What does it mean when bands appear to be getting narrower (or "funneling") as they progress down a protein gel?

There may be too much beta-mercaptoethanol (BME), sample buffer salts, or dithiothreitol (DTT) in your samples. If the proteins are over-reduced, they can be negatively charged and actually repel each other across the lanes causing the bands to get narrower as they progress down the gel.

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After transferring onto a nitrocellulose membrane, what is the best way to store the membrane overnight for probing the next day?

We recommend rinsing the membrane briefly in water, air drying and store it at room temperature in a ziplock bag. Do not place nitrocellulose in the freezer because it will shatter. Unlike PVDF, nitrocellulose membranes should never be pre-wetted in alcohol as it will cause them to shrivel.

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Are NativePAGE gels and buffers compatible with Mini Gel tank?

Yes, NativePAGE gels are compatible with our Mini Gel tank, however there is a small variation from the original protocol.

The following protocol are for using NativePage gels with the Mini Gel Tank depending on if you are also performing a western transfer or not:
If you are NOT performing a western transfer:
1. Prepare 250 mL of each buffer (Anode and Dark Blue Cathode) per gel
2. After inserting a loaded NativePAGE gel into the Mini Gel Tank and pulling the clamp forward, fill the front cathode buffer chamber to the Fill Line with Dark Blue Cathode Buffer (~200 mL per gel)
3. Add 220 mL of Anode Buffer to the back anode buffer chamber for that gel. Start the gel run

If you are performing a western transfer:
1. Prepare 250 mL of Dark Blue Cathode Buffer, 250 mL of Light Blue Cathode Buffer, and 500 mL of Anode Buffer per gel
2. After inserting a loaded NativePAGE gel into the Mini Gel Tank and pulling the clamp forward, fill the front cathode buffer chamber to the Fill Line with Dark Blue Cathode Buffer (~200 mL per gel
3. Add 220 mL of Anode Buffer to the back anode buffer chamber for that gel
4. Start the gel run; pause the run after the dark blue dye has run ~1/3 of the way through gel
a. Pour out the buffers from the Mini Gel Tank
b. Refill the back anode buffer chamber with 220 mL of Anode Buffer per gel
c. Fill the front cathode buffer chamber to the Fill Line with Light Blue Cathode Buffer (~200 mL per gel)
5. Resume the gel run

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I would like to run a NativePAGE gel. Which of your protein standards should I use?

We recommend using the NativeMark Unstained Protein Standard, Cat. No. LC0725 for native gel electrophoresis with Tris-Glycine, NuPAGE Tris-Acetate or NativePAGE gels.

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Citations et références (1)

Citations et références
Abstract
A protein secretion system linked to bacteroidete gliding motility and pathogenesis.
Authors:Sato K, Naito M, Yukitake H, Hirakawa H, Shoji M, McBride MJ, Rhodes RG, Nakayama K,
Journal:Proc Natl Acad Sci U S A
PubMed ID:19966289
'Porphyromonas gingivalis secretes strong proteases called gingipains that are implicated in periodontal pathogenesis. Protein secretion systems common to other Gram-negative bacteria are lacking in P. gingivalis, but several proteins, including PorT, have been linked to gingipain secretion. Comparative genome analysis and genetic experiments revealed 11 additional proteins involved in gingipain ... More