NovaBright™ Phospha-Light™ EXP Assay Kit for SEAP (Secreted Placental Alkaline Phosphatase) Reporter Gene Detection

El kit de ensayo NovaBright™ Phospha-Light™ EXP es un ensayo de genes indicadores quimioluminiscentes de segunda generación para la detección ultrasensible de fosfatasa alcalina placentaria secretada (SEAP) o de la isozima placentaria no secretada (PLAP). Este ensayo combina una detección ultrasensible con un rango dinámico de 5 órdenes de magnitud. El sistema de ensayo utiliza un sustrato de fosfatasa alcalina de alto rendimiento, el CSPD™, un potenciador de la quimioluminiscencia patentado de nueva generación y un sistema de tampón patentado diseñado específicamente para inhibir la actividad endógena de la fosfatasa alcalina no placentaria y ofrecer un rendimiento superior al de ensayos quimioluminiscentes de generaciones anteriores y muy sobresaliente en comparación con los métodos de detección colorimétricos y de fluorescencia. Este nuevo kit proporciona un procedimiento mucho más sencillo que otros ensayos. El ensayo es homogéneo y solo requiere dos soluciones, ambas listas para su uso. La cinética prolongada de emisión de brillo proporciona una señal de luz estable para mayor flexibilidad en bel tiempo de lectura. La señal del ensayo se mide con un luminómetro simple sin inyectores. La SEAP es una proteína indicadora que se secreta en el medio de cultivo celular y se detecta mediante pruebas de alícuotas del medio. Dado que la SEAP se libera en el medio, la lisis celular es innecesaria. No obstante, el ensayo también permite la detección de la isoenzima fosfatasa alcalina placentaria (PLAP) después de la lisis celular. La detección sensible de la enzima indicadora de fosfatasa alcalina permite llevar a cabo un gran número de aplicaciones en muchas áreas de investigación de las ciencias de la vida, incluidos los ensayos de la función viral, la expresión génica, el desarrollo de vacunas, el desarrollo de vectores virales y de métodos de administración de genes para terapia génica, monitoreo de expresión génica in vivo y nuevos ensayos funcionales celulares. Este ensayo de SEAP es uno de los métodos más fáciles y rápidos para optimizar la eficacia de la transfección. Normalmente, se han utilizado generaciones anteriores del kit 2.0 de detección del gen quimioluminiscente indicador de la enzima de fosfatasa alcalina placentaria secretada (SEAP) NovaBright™ en ensayos de genes indicadores para medir la expresión génica en líneas celulares establecidas y en células primarias transfectadas, incluyéndolas como método de lectura de las interferencias de reducción génica o ARN. Este ensayo se ha utilizado para una amplia variedad de ensayos funcionales virales, incluidos los ensayos de expresión génica viral, replicación viral, fugenicidad viral, neutralización vírica y fusión celular mediada por virus, e infectividad viral. El uso de la proteína indicadora SEAP es ideal para llevar a cabo ensayos in vivo de genes indicadores cuando se analizan muestras de suero de animales transgénicos, transfectados o infectados por vectores virales. El sistema de ensayo de gen indicador NovaBright™ se ha utilizado para medir los niveles de SEAP en sueros de animales enteros transgénicos o transfectados, incluidos sueros de ratón, rata, marmoset, mono y cerdo, y en líquido de alantoína de huevo de gallina. La proteína SEAP de ratón (mSEAP) se ha desarrollado recientemente para mejorar la estabilidad de la proteína SEAP en ratones transgénicos, y el ensayo de SEAP NovaBright™ se ha utilizado para la detección sensible de mSEAP. Además de las aplicaciones del gen indicador (expresión génica), el sistema de ensayo se utiliza para medir la SEAP como indicadora funcional para ensayos de unión receptor-ligando con una quimera SEAP-ligando, producto de una secreción mediada por proteasa, y para la actividad de la vía de secreción. El sistema de ensayo NovaBright™ también se ha utilizado como biomarcador para la medición celular de la fosfatasa alcalina no placentaria.