X-Gal

Thermo Scientific X-Gal (5-Brom-4-Chlor-3-Indolyl-Beta-D-Galactopyranosid) ist ein inertes chromogenes Substrat für Beta-Galaktosidase, das X-Gal zu einer farblosen Galaktose und 4-Chlor-3-Brom-Indigo hydrolysiert und so ein intensiv blaues Präzipitat bildet. Die Induktion des lacZ-Gens mit IPTG führt zur Hydrolyse von X-Gal und zur Entstehung blauer Kolonien. (siehe Unterstützungsdaten).

Anwendungen

• Blau-Weiß-Kolonie-Screening zur Unterscheidung zwischen rekombinanten (weißen) und nichtrekombinanten (blauen) Kolonien (siehe Referenz 1)
• Visualisierung der Beta-Galaktosidase-Reportergenexpression in transfizierten eukaryotischen Zellen
• Nachweis von Beta-Galaktosidase-Aktivität in immunologischen histochemischen Verfahren

Hinweis
• Die Vorbereitung einer 20 mg/ml-Stammlösung in Dimethylformamid (DMF) oder Dimethylsulfoxid (DMSO) wird für X-Gal empfohlen. DMF löst einige Kunststoffmaterialien auf. Daher sollte eine direkte Zugabe von DMF-haltiger Lösung in Kunststoff-Petrischalen vermieden werden.
• DMF ist toxisch. Bevor die Bakterien auf der Agarplatten ausplattiert werden, sollte die Dimethylformamid enthaltende X-Gal-Lösung zuvor vollständig getrocknet werden lassen.

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