SuperScript™ IV System für Erststrangsynthese

Das SuperScript™ IV Erststrang-Synthesesystem für RT-PCR ist für die Synthese von Erststrang-cDNA aus gereinigter Poly(A)+ oder Gesamt-RNA optimiert. Das Set umfasst SuperScript™ IV Reverse-Transkriptase (RT), ein proprietäres mutiertes MMLV für hohe und verlässliche cDNA-Synthese-Ausbeuten in RT-Reaktionen. Das SuperScript™ IV-Synthesesystem ist gegenüber dem SuperScript™ III-basierten System im Hinblick auf Hemmstoff-Resistenz, Aktivität und Reaktionsgeschwindigkeit deutlich verbessert worden, wobei gleichzeitig alle Vorteile des vorherigen System erhalten blieben, einschließlich erhöhter Thermostabilität und äußerst effizienter Synthese von Volllängen-cDNA sowie reduzierter RNase-Aktivität. Das SuperScript™ IV System ist so konzipiert, dass es eine zuverlässige, konsistente und schnelle cDNA-Synthese in Gegenwart von Inhibitoren bietet, die in einer Vielzahl von Proben vorhanden sind und dazu führen, dass andere derzeit erhältliche RTs eine unzureichende Leistung erbringen.

Das SuperScript™ IV Erststrang-Synthesesystem enthält alle für RT-Reaktionen erforderlichen Komponenten sowie zusätzlich ein Kontrollgen und Primer und bietet Ihnen die Flexibilität zur Anpassung des RT-Aufbaus im Einklang mit den Anforderungen Ihrer Anwendung. Das SuperScript™ IV Synthesesystem ist die erste Wahl in Bezug auf Leistung und Flexibilität bei RT-PCR-Anwendungen. Empfohlen für alle RT-PCR-Anwendungen, insbesondere wenn Reproduzierbarkeit und Zuverlässigkeit im Vordergrund stehen und wenn Inhibitoren in der RNA-Probe die cDNA-Synthese beeinträchtigen könnten, was in Genexpressionsstudien zu Abweichungen führt.

Zu den Merkmalen des SuperScript™ IV Erststrang-Synthesesystems zählen:
• Deutlich verbesserte Resistenz gegenüber einer Vielzahl von Inhibitoren, die die cDNA-Synthese beeinträchtigen können
• Robuste und spezifische cDNA-Synthese für ein breites Spektrum von Probentypen
• Eine schnellere Reverse-Transkriptase-Reaktion, die die Inkubationszeit von > 50 Min. auf 10 Min. reduziert
• Deutlich gesteigerte Prozessivität im Vergleich zu SuperScript™ III RT

Enzymquelle
Aufgereinigt aus E. coli, die das pol-Gen von M-MLV exprimieren, modifiziert zur Erhöhung der Thermostabilität, Halbwertszeit, Prozessivität sowie Inhibitorresistenz und zur Verringerung der RNase H-Aktivität.

Wirkungs- und Qualitätskontrolle
Endodesoxyribonuklease-, Exodesoxyribonuklease- und Ribonuklease-Assays sowie Ausbeute und Länge der cDNA.

Einheitendefinition
Eine Einheit SuperScript™ IV RT ist die Enzymmenge, die benötigt wird, um in 10 Min. bei 37 °C mit Poly(A)-Oligo(dT)_12-18 als Template/Primer 1 nmol Desoxyribonukleotid in säurefällbares Material einzubinden.

Reaktionsbedingungen der Einheit
50 mM Tris-HCl (pH 8,3), 4 mM MgCl², 10 mM DTT, 50 mM KCl, 0,5 mM dTTP, 0,4 MBq/ml [³H]-dTTP, 0,4 mM Poly(A)-Oligo(dT)_12-18 und Enzym in 20 μl für 10 Min. bei 37 °C.