Pierce™ 660 nm Protein-Assay-Kit

Der Pierce 660 nm-Protein-Assay ist ein gebrauchsfertiges, reinigungs- und reduziermittelkompatibles Assay-Reagenz zur schnellen Messung der Gesamtproteinkonzentration im Vergleich zu einem Proteinstandard. Der Assay ist linearer als die auf Coomassie basierenden Bradford-Assays und mit höheren Konzentrationen der meisten Detergenzien, Reduktionsmittel und anderen häufig verwendeten Reagenzien kompatibel.

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Merkmale des 660 nm-Proteinassay-Kits:
• Kompatibel — Funktioniert mit einer größeren Auswahl an Detergenzien und Reduktionsmitteln als andere farbstoffbasierte Assays
• Gebrauchsfertig — Einzelnes Reagenz mit einem einfachen Mix-and-Read-Protokoll; Kein Arbeitsreagenz muss vorbereitet werden
• Linear — Erzeugt Standardkurven, die linearer sind als mit der Bradford-Assay-Methode
• Assayformat— Assay kann in Reagenzgläsern oder Mikrotiterplatten durchgeführt werden
• Probenvolumen —Erfordert nur 10 µl für Mikrotiterplatten oder 100 µl für die Reagenzglasverfahren
• Lagerung — Lagerung bei Raumtemperatur

Das dazu gehörige Ionische Detergenzien-Kompatibilitätsreagenz (IDCR) sorgt für noch mehr Waschmittelverträglichkeit und ist damit einer der einzigen Proteinassays, die für Proben geeignet sind, die Laemmli SDS-Probenpuffer mit Bromophenolblau enthalten. Der Pierce 660 nm Proteinassay führt zwar zu 37 % mehr Proteinvariationen als bei Assays wie dem BCA-Proteinassay, dennoch machen die einfache Anwendung mit nur einem Reagenz und die größere Substanzkompatibilität das 660 nm-Assay zur praktischen Lösung für viele Routineanwendungen. Der Pierce 660 nm-Protein-Assay kann entweder in einem Reagenzglas- oder Mikrotiterplattenformat durchgeführt werden.

So erkennt der Pierce 660 nm-Assay Protein
Der Pierce 660 nm-Protein-Assay basiert auf der Bindung eines proprietären Farbstoffmetallkomplexes an Protein unter sauren Bedingungen, die eine Verschiebung des Absorptionsmaximums des Farbstoffs verursacht, das bei 660 nm gemessen wird. Der Färbung des Farbstoff-Metall-Komplexes wechselt nach der Proteinbindung von rötlich-braun zu grün. Der Farbwechsel wird durch die Deprotonierung des Farbstoffs bei niedrigem pH-Wert hervorgerufen, unterstützt durch Interaktionen mit positiv geladenen Aminosäuregruppen in Proteinen. Daher interagiert der Farbstoff hauptsächlich mit Grundrückständen in Proteinen, wie Histidin, Arginin und Lysin sowie in geringerem Maße Tyrosin, Tryptophan und Phenylalanin.

Die im Assay produzierte Farbe ist stabil und steigt proportional zu einer breiten Palette steigender Proteinkonzentrationen, selbst bei Vorhandensein von Detergenzien und Reduktionsmitteln, die mit Bradford- und BCA-Proteinassays nicht kompatibel wären.

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