Pierce™ Coomassie Plus (Bradford-)Assay-Reagenz

Der Pierce Coomassie Plus (Bradford) Proteinassay ist ein gebrauchsfertiges, Reduktionsmittel-kompatibles, verbessertes Reagenz für einen Bradford-Assay zur schnellen Messung der Gesamtproteinkonzentration, im Vergleich mit einem Protein-Standard. Das Pierce Coomassie Plus Assay-Reagenz bietet eine erhöhte Linearität und die Hälfte der Protein-zu-Protein-Variabilität anderer kommerzieller Bradford-Assay-Formulierungen.

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Merkmale des Coomassie Plus Proteinassays:
• Kolorimetrisch — Messung mit einem Standard-Spektralphotometer oder Plattenlesegerät bei 595 nm
• Einfach zu verwenden — einzelnes Reagenz; keine Vorbereitung von Arbeitsreagenzien erforderlich
• Schnell — Fast sofortige Farbentwicklung; Hinzufügen, Mischen und Ablesen von Ergebnissen
• Assay-Bereich — Weist Proteinkonzentrationen im Bereich von 1 bis 1500 µg/ml nach
• Besser — Bewährte Linearität und Ansprech-Uniformität im Vergleich zu herkömmlichen Bradford-Rezepturen
• Flexibel — Mikrotiterplattenprotokolle und Küvettenprotokolle werden bereitgestellt und können an mehrere Target-Bereiche angepasst werden

Das Pierce Coomassie Plus Assay Reagenz ist ein einzelne, gebrauchsfertige Lösung für die Messung der Proteinkonzentration. Fügen Sie einfach das Reagenz zu gleichen Anteilen an Proben und Standards hinzu, mischen jene, und messen das Absorptionsvermögen bei 595 nm. Der Assay kann entweder im Reagenzglas oder auf Mikrotiterplatten durchgeführt werden. Der Proteinassay ist mit den meisten Salzen, Lösungsmitteln, Puffern, Thiolen, Reduktionsstoffen und Metallchelatmitteln, die in Proteinproben vorkommen, kompatibel.

Wie das Coomassie Plus (Bradford) Assay Protein nachweist
Die Verwendung von Coomassie G-250 Farbstoff in einem kolorimetrischen Reagenz für den Nachweis und die Quantifizierung des Gesamtproteins wurde von Dr. Marion Bradford 1976 erstmals beschrieben. In der sauren Umgebung des Reagenz bindet Protein an den Coomassie-Farbstoff. Dies führt zu einer spektralen Verschiebung von der rötlich-braunen Form des Farbstoffs (maximale Absorption bei 465 nm) zur blauen Form des Farbstoffs (maximale Absorption bei 610 nm). Der Unterschied zwischen den beiden Formen des Farbstoffs ist bei 595 nm am größten, sodass dies die optimale Wellenlänge zum Messen der blauen Farbe des Coomassie-Farbstoff-Protein-Komplexes ist. Falls gewünscht, kann die blaue Farbe bei einer beliebigen Wellenlänge zwischen 575 nm und 615 nm gemessen werden. An den beiden Extremen (575 nm und 615 nm) liegt ein Verlust von etwa 10 % in der gemessenen Farbmenge (Absorption) im Vergleich zu der bei 595 nm erhaltenen.

Die Entwicklung von Farbe in Coomassie farbbasierten Proteinassays (Bradford) wurde mit dem Vorhandensein bestimmter grundlegender Aminosäuren (hauptsächlich Arginin, Lysin und Histidin) im Protein in Verbindung gebracht. Van-der-Waals-Kräfte und hydrophobe Wechselwirkungen sind ebenfalls an der Bindung des Farbstoffs am Protein beteiligt. Die Anzahl an jedem Proteinmolekül gebundener Coomassie-Farbstoff-Liganden ist ungefähr proportional zur Anzahl positiver Ladungen auf dem Protein. Freie Aminosäuren, Peptide und Proteine mit niedrigem Molekulargewicht erzeugen keine Farbe mit Coomassie-Farbstoff-Reagenzien. Im Allgemeinen muss die Masse eines Peptids oder Proteins mindestens 3.000 Dalton betragen, um mit diesem Reagenz getestet zu werden.

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