Das Thermo Scientific Pierce Kit zur schnellen Maus-Antikörper-Isotypisierung plus Kappa und Lambda ist ein Kassetten-basiertes Einweg-Kit für die Bestimmung der Klassen- und Unterklassenidentität monoklonaler Maus-Antikörper für 5-min-Lateral-Flow-Assays.

Dieses Antikörper-Isotypisierungskit verwendet Kassetten, die innerhalb von 5 Minuten, nachdem eine kleine Probenmenge eines verdünnten Kulturüberstands oder einer Aszites-Flüssigkeit in das Proben-Well pipettiert wurde, eine Farbreaktion des monoklonalen Antikörper-Isotyps zeigen. Das Kit bestimmt Maus-IgG1, -IgG2a, -IgG2b, -IgG3, -IgA und -IgM sowie die Leichtketten-Identität (Kappa- vs. Lambda-Leichtketten).

Merkmale des Pierce Kits zur schnellen Maus-Antikörper-Isotypisierung:

• Lange Haltbarkeit – bei Raumtemperatur über 1 Jahr lang stabil
• Nur ein Schritt – geben Sie eine verdünnte Antikörperprobe in das Ladungs-Well der Kassette
• Schnell – innerhalb von 5 Minuten erscheint ein Band, das den Antikörper-Isotyp anzeigt
• Empfindlich – Nachweis von Antikörpern in Gewebekulturmedien oder Proben mit Aszitesflüssigkeit bei einer Konzentration von mehr als 10 ng/ml
• Spezifisch – das Assay löst keine Kreuzreaktion mit fötalem Kälberserum (FBS) aus
• Zuverlässig – die Ergebnisse ähneln den standardmäßigen ELISA-basierten Isotypisierungsassays

Jeder Assay des Pierce Kits zur schnellen Isotypisierung wird durchgeführt, indem einfach eine entsprechend verdünnte Probe des Zellkulturüberstands oder der Maus-Aszitesflüssigkeit in das Well in der kleinen Kassette gegeben wird. In die Kassette eingebettete Goldkonjugate bilden lösliche Komplexe mit den spezifische Klassen- bzw. Unterklassen der Antikörper in der Probe. Diese Komplexe bewegen sich an der Membran entlang bis sie auf die Anti-Isotyp- und Klassen-spezifischen Antikörper der imprägnierten Membran treffen. Die Ergebnisse werden als rotes Band dargestellt, das den Isotyp oder die Unterklasse des Antikörpers anzeigt.

Die Bestimmung der Klasse und Unterklasse eines monoklonalen Antikörpers ist bei der Planung der besten Immunglobulin-Reinigungsmethode nützlich. Beispielsweise werden Maus-IgA und -IgM am besten nach Größe (d. h. Gelausschluss) oder mittels Immunaffinitäts-Trennsäulen aufgereinigt. Maus-IgG2a und -IgG2b werden mit immobilisiertem Protein A bei pH 7 bis 8 gereinigt. Maus-IgG1 bindet dagegen am besten an Protein A bei pH 8 bis 9. Immunoglobulin, das Kappa-Leichtketten enthält, kann mit immobilisiertem Protein L gereinigt werden.

Das Pierce Kit zur schnellen Isotypisierung ist sowohl mit Gewebekulturüberstand als auch mit Maus-Aszitesflüssigkeit kompatibel und ist empfindlicher als herkömmliche Latex-Bead-basierte Dipstick-Assays und viel schneller als ELISA-basierte Isotypisierungs-Assays. Das Kit erfordert nur 0,5 µl Aszitesflüssigkeit, 5 bis 55 µl Zellkulturüberstand oder 1,5 ng gereinigten Antikörper.

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