Pierce™ Fluoreszenz-Biotin-Quantifizierungs-Kit

Das Thermo Scientific Pierce Fluoreszenz-Biotinquantifizierungskit benötigt nur zehn Mikroliter Probe, um den Biotinylierungsgrad markierter Antikörper und anderer Biomoleküle genau zu messen.

Merkmale des Fluoreszenz-Biotinquantifizierungskits:

• Schnell—Erfordert nur fünf Minuten Inkubationszeit
• Wirtschaftlich—Benötigt nur 10 µl Probe (ca. 750 ng biotinyliertes IgG)
• Empfindlich—Der lineare Arbeitsbereich reicht von 10 bis 60 Picomol Biotin

Dieser auf Mikrotiterplatten basierende Biotin-Assay ist einfach durchzuführen, indem der mitgelieferte Fluoreszenzreporter den biotinylierten Proben und den Standards für verdünnte Biozytine hinzugefügt wird. Das Avidin fluoresziert, wenn die schwach interagierende HABA (4'-Hydroxyazobenzol-2-Carbonsäure) durch das Biotin verdrängt wird. Die Biotinmenge wird durch den Vergleich der Fluoreszenz der Probe mit der Biocytin-Standardkurve bestimmt. Dieser Assay erfordert ein geringeres Probenvolumen als der kolorimetrische HABA-Assay für Mikrotiterplatten und ist viel empfindlicher.

Inhalt
Assay-Puffer, HABA-Avidin Fluoreszenz-Reporterlösung und Biozytin-Kontrolle

Anforderungen
Schwarze, opake 96-Well Mikrotiterplatte und Fluoreszenzplatten-Lesegerät (Anregung 494 nm; Emission 520 nm)

Die hochspezifische Interaktion von Avidin oder Streptavidin mit Biotin ist die Basis für viele Aufreinigungs- und Nachweissysteme. Die Quantifizierung des Biotinylierungsgrades ist notwendig, um zu beurteilen, ob ein Biotin-Markierungsverfahren erfolgreich war und welche Menge an biotinylierten Molekülen für eine bestimmte Anwendung verwendet werden soll.

HABA (4'-Hydroxyazobenzol-2-carbonsäure) ist ein Färbemittel, das schwach mit Avidin interagiert und häufig in kolorimetrischen Assays zur schnellen Schätzung des Biotin-Protein-Verhältnisses verwendet wird. Das Fluoreszenz-Biotin-Quantifizierungskit verwendet auch den HABA-Farbstoff, ist jedoch empfindlicher und genauer. Eine Vormischung von fluoreszierendem Avidin mit HABA (DyLight Reporter) wird der Lösung hinzugefügt, die die biotinylierte Probe enthält. Aufgrund seiner höheren Affinität zu Avidin verdrängt Biotin die HABA, wodurch das Avidin fluoreszieren kann. Die Menge des Biotin wird in einer Mikrotiterplatte gemessen, indem die Fluoreszenz mit einer Biozyten-Standardkurve verglichen wird.

Das Fluoreszenz-Biotinquantifizierungskit erfordert nur 10 µl Probe. Im Gegensatz dazu erfordert die herkömmliche kolorimetrische Methode 100 µl Probe, und das Fluoreszenz-Assay-Kit eines anderen führenden Anbieters 50 µl. Unser Kit ist genauer als der Fluoreszenz-Biotin-Assay des anderen Anbieters (Marke I).