Pierce™-Kit für die Umkehrphase-Peptid-Fraktionierung mit hohem pH-Wert

Das Thermo Scientific™ Pierce™ Umkehrphasen-Peptidfraktionierungskit mit hohem pH-Wert erhöht die Proteinidentifizierung von LC/MS-Analysen durch orthogonale Peptidfraktionierung komplexer Peptidproben.

• Anwenderfreundlich—Harz im Einweg-Spin-Säulenformat
• Verbesserte Proteinidentifikationen—Anstieg der Proteinidentifikationen um ≥50 % im Vergleich zu unfraktionierten Proben
• Reproduzierbar—Elutionsprofile und fraktionale Auflösung variieren um weniger als 20 %
• Optimiert—robustes Verfahren zur maximalen Proteinidentifizierung und Peptidrückgewinnung bei minimaler fraktionaler Überlappung
• Kompatibel—Reagenzien, die mit einer Vielzahl komplexer Proben validiert wurden, einschließlich TMT™ markierter Peptide

Um die Deep-Proteom-Sequenzierung zu ermöglichen, ist es oft notwendig, die Probenkomplexität vor der LC/MS-Analyse durch Fraktionierung in einer orthogonalen Dimension zu reduzieren. Das Pierce Umkehrphasen-Peptidfraktionierungskit mit hohem pH-Wert nutzt die Umkehrphasenchromatographie mit hohem pH-Wert zur Trennung von Peptiden durch Hydrophobizität und bietet eine hervorragende Orthogonalität bei LC-MS-Umkehrphasengradienten mit niedrigem pH-Wert.

Das Kit wurde entwickelt, um die Proteinidentifizierung durch die Verwendung eines firmeneigenen Umkehrphasenharzes in einem anwenderfreundlichen Spin-Säulenformat mit einem Protokoll für eine Fraktionierung bei hohem pH-Wert zu verbessern. Im Gegensatz zur starken Kationenaustausch-Fraktionierung (SCX) ist für Umkehrphasenfraktionen mit hohem pH-Wert vor der LC/MS-Analyse kein zusätzlicher Entsalzungsschritt erforderlich.

Das Umkehrphasen-Peptidfraktionierungskit mit hohem pH-Wert enthält einen Puffer mit hohem pH-Wert (0,1 % Triethylamin) und zwölf Spin-Säulen mit pH-resistentem Umkehrphasenharz. Jede Umkehrphasenfraktionierungs-Spin-Säule ermöglicht die Fraktionierung von 10 – 100 µg Peptidprobe mit einer Mikrozentrifuge.

Mit diesem Kit können native, phosphorylierte sowie mit Tandem Mass Tag (TMTTM)-markierte und andere komplexe Peptidmischungen fraktioniert werden. Die Kombination der von den einzelnen Fraktionen generierten Suchergebnisse trägt zur Verbesserung der Proteinsequenzabdeckung bei und erhöht die Anzahl der identifizierten Proteine im Vergleich zu unfraktionierten Proben.

Anwendungen:
• Reduzierung der Probenkomplexität zur Identifizierung von Zielobjekten
• Durchführung von Systembiologiestudien
• Reduzierung der Probenkomplexität zur Verbesserung von Quantifizierungsstudien