1-Step human-gekoppeltes IVT-Kit - DNA

Thermo Scientific 1-Step Human In Vitro Protein Expressions-Kits ermöglichen die Translation und post-transkriptionale Modifikation von Proteinen mit voller Länge von mRNA- oder Plasmid-Templates mit Ausbeuten von bis zu 100 µg/ml pro Reaktion.

Die humanen IVT-Kits sind einzigartige Proteinexpressionssysteme auf Basis von HeLa-Zelllysaten für die In-vitro -Translation oder gekoppelte Transkriptions-/Translationsreaktionen. Die Proteinexpression wird in einer einzigen 90-minütigen Reaktion durchgeführt, die in Kombination mit dem optimierten pT7CFE1-Expressionsvektor auf bis zu 6 Stunden verlängert werden kann und eine kontinuierliche Proteinproduktion von bis zu 100 µg/ml ermöglicht. Die humanen IVT-Kits können funktionelle Enzyme, Phosphoproteine, Glykoproteine und Membranproteine zur sofortigen Verwendung bei der Untersuchung von Proteininteraktionen, der Durchführung schneller Mutationsanalysen und der Aktivitätsmessung exprimieren.

Merkmale des 1-Step Human Coupled IVT-Kits:

• Funktional — Verwendung der humanen Translationsmaschinerie zur Expression aktiver Proteine
• Praktisch — Transkription und Translation in nur einem Schritt
• Leistungsstark — Höhere Ausbeuten als eine In-vitro-Kaninchen-Retikulozyten-Translation
• Zuverlässig — Expression von Proteinen, die in Kaninchen-Retikulozytensystemen versagen

Besser als herkömmliche Methoden:
• Zellfreie HeLa-Extrakte können Proteine mit post-translationalen Modifikationen exprimieren
• Die präzise Translation liefert Proteine mit voller Länge, die mit den nachgeschalteten Anwendungen kompatibel sind
• Die Proteintranslation wird mit dem EMCV-IRES-Element und anderen mRNA-stabilisierenden Elementen optimiert

Lieferumfang:
• Die Komplettkits enthalten HeLa-Zelllysat, akzessorische Proteine, Reaktionsgemisch, nukleasefreies Wasser, Expressionsvektor und einen GFP-positiven Kontrollvektor

Erforderlich:
• 30 °C-Inkubator oder Wasserbad

Anwendungen:
• Proteinexpression zur Messung der Enzymaktivität
• Durchführung der Mutationsanalyse
• Proteinexpression zur Verwendung in Gel-Mobilitäts-Shift-Assays
• Co-Immunpräzipitation
• Expression zytotoxischer Proteine
• Markierung unnatürlicher Aminosäuren

Das 1-Step Coupled Human IVT Kit for DNA ist ein zellfreies System, das die zelluläre Transkriptions- und Translationsmaschinerie einer modifizierten Hela-Zelllinie nutzt. Das Verfahren ist schnell und einfach und bietet eine effektive Alternative zu anderen Proteinexpressionsverfahren. Fügen Sie einfach ein geeignetes Expressionskonstrukt zu einer Mischung aus HeLa-Zelllysat, akzessorischen Proteinen und Reaktionsgemisch hinzu und inkubieren Sie 90 Minuten bis über Nacht bei 30 °C.

Das 1-Step Human IVT Kit für mRNA verwendet auch den humanen Translationsmechanismus für Proteine zur Herstellung von funktionalem Protein. Dieses Kit wird zur Translation von mRNA-Transkripten empfohlen, die ein EMCV-IRES-Element und mRNA-Stabilisierungsmerkmale aufweisen, die in den pT7CFE1-Expressionsvektor integriert sind.

Das humane In-vitro-Translationssystem ist robust und exprimiert Proteine von einer Vielzahl von Spezies wie unter anderem Säugetiere, Bakterien und Protozoen. Vergleichsstudien zeigen, dass die Expressionsniveaus funktioneller Proteine, wie Luziferase, im humanen System im Vergleich zu Systemen auf Basis von Kaninchen-Retikulozyten oder E. coli wesentlich höher sind. Darüber hinaus sind Proteine, die mit dem humanen In-vitro-Translationssystem exprimiert werden, nicht mit Substanzen kontaminiert, die nachgeschaltete Anwendungen stören können.

Weitere Produktdaten
• Protokoll für die In-vitro-Proteinexpression mit mRNA-Templates
• Anwendungshinweise zur Proteinbiologie