Die Bac-to-Bac Baculovirus-Expression ist eine effiziente Methode zur Herstellung von Baculoviren für die Expression von Proteinen in Insektenzellen auf hohem Niveau. Sie beruht auf der Erzeugung rekombinanter Viren durch stellenspezifische Transposition in E. coli und nicht auf homologer Rekombination in Insektenzellen. Das pFastBac HBM TOPO-Expressionssystem bietet folgende Merkmale:

• Expression von sezernierten Proteinen – Der Bac-to-Bac HBM TOPO-Vektor enthält das Honigbienen-Melittin (HBM)-Sekretionssignal, um eine sezernierte Expression des Proteins zu ermöglichen. Da Glykoproteine ohne Sekretionssignal nicht glykosyliert werden können, wird dieser Vektor für die Expression von Glykoproteinen empfohlen.

• Flexibilität – Der Bac-to-Bac HBM TOPO-Vektor enthält einen C-terminalen His-Tag mit einem TEV-Spaltungsort, um eine einfache Aufreinigung von His-markierten Proteinen mit Nickel-Chelatharzen (wie dem Invitrogen ProBond Aufreinigungssystem) und die Erzeugung nativer Proteine mithilfe der Invitrogen AcTEV Protease zu ermöglichen.

• Schnelles Klonieren, einfaches Screening – Die Blunt TOPO-Klonierungstechnologie ermöglicht in nur fünf Minuten das Klonieren von PCR-Produkten mit stumpfen Enden in den pFastBac TOPO-Vektor. Darüber hinaus wird das pFastBac TOPO-Expressionskit mit Mach1-T1R-E. coli geliefert, das die Visualisierung von Kolonien acht Stunden nach dem Beschichten auf Ampicillin-selektiven Platten ermöglicht, da diese eine schnellere Verdoppelung im Vergleich zu anderen Standard-Klonierungsstämmen aufweisen. Erfahren Sie mehr über die Vorteile des Klonierens mit TOPO ›

• Hohe Transfektionseffizienz mit ExpiFectamine Sf-Transfektionsreagenz – Die Bac-to-Bac TOPO-Expressionskits werden jetzt mit dem ExpiFectamine Sf-Transfektionsreagenz der nächsten Generation für effiziente DNA-Transfektion in Insektenzellen mit schnellen, flexiblen Protokollen geliefert. Erfahren Sie mehr über dieses Reagenz ›

• Zeitsparendes Expressions-Bacmid – Beim Bac-to-Bac-System kombiniert die Expressionskassette des pFastBac-Vektors mit dem Parental-Bacmid in kompetenten DH10Bac-E. coli-Zellen zu einem Expressions-Bacmid. Das Bacmid wird dann in Insektenzellen zur Produktion rekombinanter Baculovirus-Partikel transfiziert.

• Einfaches Kolonie-Screening – Das Parental-Bacmid in DH10Bac-E. coli enthält ein Segment des lacZa-Gens. Das lacZa-Gen wird bei der Umsetzung der Expressionskassette in das Bacmid gestört, wodurch eine blau/weiße Selektion von Rekombinanten zur leichteren Identifizierung rekombinanter Kolonien möglich wird.

• Hohe Proteinexpression – Der pFastBac-Vektor verwendet den starken Polyhedrin-Promotor, um hohe Expressionsniveaus in einer Vielzahl von Insektenzelllinien wie Sf9, Sf21 und High Five Zellen zu erzeugen.