Invitrogen Collibri-Bibliotheks-Amplifikations-Mastermix ist eine gebrauchsfertige Lösung für die Amplifikation von Next-Generation-Sequenzierungs(NGS)-Bibliotheken. Der Mastermix enthält Platinum SuperFi DNA-Polymerase in Kombination mit einem proprietären Reaktionspuffer, der alle erforderlichen Komponenten für eine effiziente Bibliotheks-Amplifikation mit minimaler Verzerrung und überlegener Genauigkeit enthält.

Merkmale sind u. a:
• Hohe Genauigkeit – Minimale Fehlerraten, ähnlich wie bei PCR-freien Methoden
• Hohe Effizienz – Hohe Ausbeuten aus winzigen Eingangsmengen
• Minimale Verzerrung – Gleichmäßige Verstärkung, unabhängig vom GC-Gehalt

Dieser Collibri Bibliotheks-Amplifikations-Mastermix wird mit einem 10X Primermix geliefert, der auf die P5- und P7-Regionen von Illumina Adaptern zielt. Der Mastermix wird mit einem inerten blauen Farbstoff ergänzt, während der Primermix einen gelben Farbstoff enthält. Durch das Mischen beider Komponenten in einer PCR-Reaktion wird die endgültige PCR-Lösung grün. Dies ist eine visuelle Hilfe bei der Pipettierung und trägt dazu bei, das Risiko für Pipettierfehler während des Reaktionsaufbaus zu verringern.

Platinum SuperFi DNA-Polymerase weist sowohl 5’- bis 3’-Polymerase- als auch 3’- bis 5’-Exonuklease(Proofreading)-Aktivitäten auf, jedoch keine 5’- bis 3’-Exonuklease-Aktivität. Die außergewöhnlich starke Proofreading-Aktivität gewährleistet die Verstärkung von NGS-Bibliotheken mit höchster Sequenzgenauigkeit, wodurch sich NGS-Fehlerraten ähnlich wie bei PCR-freien Methoden ergeben

Der proprietäre Reaktionspuffer enthält alle erforderlichen PCR-Komponenten und Additive, um eine effiziente und gleichmäßige Verstärkung der Bibliothek unabhängig vom GC-Gehalt zu ermöglichen und so die Abdeckung von GC- und AT-reichen Sequenzen und anderen komplexen Regionen zu verbessern. Dank der hohen Verstärkungseffizienz kann die gewünschte Ausbeute mit weniger Zyklen erreicht werden.

Die Platin-Hot-start-Technologie hemmt die DNA-Polymeraseaktivität bei Umgebungstemperaturen und ermöglicht so den Reaktionsaufbau und die Lagerung von vorgefertigten PCR-Reaktionen bis zu 24 Stunden lang vor der PCR.