Das Click-iT™ HPG Alexa Fluor™ 488 Assay-Kit für die Proteinsynthese bietet eine schnelle, empfindliche, ungiftige und nicht radioaktive Methode zum Nachweis der Synthese von naszierenden Proteinen mittels Fluoreszenzmikroskopie, High-Content-Bildgebung oder Durchflusszytometrie. Im Kit enthalten sind L-Homopropargylglycin (HPG), eine Aminosäure analog zu Methionin, die einen Alkin-Anteil enthält, und Alexa Fluor ™ 488 Azid. Das HPG wird kultivierten Zellen zugeführt und während der aktiven Proteinsynthese in Proteine integriert. Die Zugabe des Alexa Fluor™ 488 Azids führt zu einer chemoselektiven Ligation oder „Click“-Reaktion zwischen dem grün fluoreszierenden Azid und dem Alkin, wodurch die modifizierten Proteine durch eine bildbasierte Analyse nachgewiesen werden können.

• Nicht radioaktive Alternative – Eine Alternative zum herkömmlichen ³⁵S-Methionin
• Visualisierung von Proteindynamik in großem Umfang – Die fluoreszierende Markierung von Proteinen ermöglicht die Bestimmung ihrer Lokation, einschließlich Aggregation
• Spezifität – Selektive, spezifische Reaktion zwischen Markern und Nachweis-Tags
• Stabilität – Das Produkt enthält eine irreversible, kovalente Bindung
• Multiplex-fähig – Verwendung in Verbindung mit Click™-iT AHA (Azid-Aminosäure und Alkin-Farbstoff) zum Nachweis räumlicher und zeitlicher Abweichungen
• Anwendbar bei biologischen Proben – Einfacher Nachweis; hohe Empfindlichkeit und niedriger Hintergrund, unabhängig von der Komplexität

Das Click-iT™ HPG Alexa Fluor™ 488 Assay-Kit für die Proteinsynthese wurde erfolgreich in HeLa-, A549- und U-2-OS-Zellen mit einer Vielzahl von Reagenzien getestet, die die Proteinsynthese hemmen, einschließlich Cycloheximid und Anisomycin. Die Anwendbarkeit dieser Sonden zur Überwachung der Proteindegradation wurde auch mit Inhibitoren des Proteasoms (MG132 und Bortezomib) und Autophagie-Blockern (Chloroquin) in HeLa-Zellen nachgewiesen.

Aufgrund der Unterschiede in der Click-iT™ Chemie zwischen dem Click-iT™ HPG Alexa Fluor™ 488 Assay-Kit für die Proteinsynthese und Click™-iT AHA mit Alexa Fluor™ 594 Alkin können diese Reagenzien in Verbindung mit der räumlichen oder zeitlichen Bestimmung von Unterschieden in der Synthese neu entstandener Proteine verwendet werden.