Das Click-iT® Plus EdU Alexa Fluor® 647 Durchflusszytometrie-Assay-Kit ist ein einfacher, stabilerer Assay für die Analyse der DNA-Replikation in proliferierenden Zellen im Vergleich zu herkömmlichen BrdU-Methoden. Neu synthetisierte DNA wird mit dem 647 nm-Laser des Durchflusszytometers analysiert. Die Click-iT® Plus-Formulierung ist kompatibel mit standardmäßigen Fluorophoren, einschließlich R-PE-und R-PE-Tandems, sowie fluoreszierenden Proteinen.

• Multiplex-fähig: Kompatibel mit R-PE (und Tandems) und fluoreszierenden Proteinen
• Präzise: Im Vergleich zu BrdU-Assays überlegene Resultate erzielen
• Schnell: Ergebnisse in nur 60 Minuten

Auswahlhilfe für alle Click-iT™ EDU- und Click-iT™ Plus EDU-Assays für die Durchflusszytometrie anzeigen.

Multiplex-fähig
Die Click-iT® Plus Formulierung bietet eine erhöhte Multiplexierbarkeit im Vergleich zu den ursprünglichen Click-iT® EDU Durchflusszytometrie-Assays. Click-iT® Plus EdU-Assays können in Verbindung mit R-PE- und R-PE-Tandems und fluoreszierenden Proteinen, sowie GFP und mCherry verwendet werden, und das ohne Verlust der Genauigkeit oder Geschwindigkeit der ursprünglichen Click-iT® EdU-Assays.

Eine fortschrittliche Methode, die Ihnen bessere Ergebnisse liefert als BrdU
Die genaueste Methode der Proliferationsanalyse ist die direkte Messung der DNA-Synthese. Ursprünglich wurde dies mit der Einbindung radioaktiver Nukleoside durchgeführt. Diese Methode wurde durch die Antikörper-basierte Erkennung des Nukleosid-Analogons Bromdesoxyuridin (BrdU) ersetzt. Das Click-iT® Plus EdU Durchflusszytometrie-Assay ist eine neuartige Alternative zum BrdU-Assay. EdU (5-Ethynyl-2´-Deoxyuridin) ist ein Thymidin-Analogon und wird während der aktiven DNA-Synthese in die DNA eingebunden. Die Erkennung beruht auf Klick-Chemie, einer Kupfer-katalysierten kovalenten Reaktion zwischen einem Azid und einem Alkin. In dieser Anwendung befindet sich das Alkin auf der Ethynylverbindung der EdU, während das Azid mit dem Alexa Fluor® Farbstoff gekoppelt ist. Standardmethoden der Durchflusszytometrie werden zur Bestimmung des prozentualen Anteils der S-Phase-Zellen in der Population verwendet.

Milde Bedingungen erlauben die Verwendung mit Zellzyklus-Farbstoffen und Antikörpern
Die geringe Größe des Farbstoff-Azids ermöglicht den effizienten Nachweis der einbezogenen EdU unter milden Bedingungen, während die standardmäßige Aldehyd-basierte Fixierung und Lösungsmittelpermeabilisierung für das Click-iT® Plus Detektionsreagenz ausreichend ist, um Zugang zur DNA zu erhalten. Dies steht im Gegensatz zu BrdU-Assays, die eine Denaturierung der DNA (mit HCI, Wärme oder Verdauung mit DNase) zur Exposition des BrdU erfordern, so dass es mit einem anti-BrdU-Antikörper nachgewiesen werden kann. Probenverarbeitung für das BrdU-Assay kann zu Signalveränderungen in der Zellzyklus-Verteilung sowie Zerstörung der Antigenerkennungsstellen führen, wenn die HCl-Methode verwendet wird. Im Gegensatz dazu ist das anwenderfreundliche Click-iT® Plus EdU-Assay mit Zellzyklus-Farbstoffen kompatibel. ® Der Click-iT Plus EDU-Assay kann auch mit Antikörpern gegen Oberflächen- und intrazelluläre Marker sowie mit Standard-Fluorophoren markierten Konjugaten, einschließlich R-PE, R-PE Tandems und fluoreszierenden Proteinen (GFP und mCherry), multipliziert werden.

Schnelles und einfaches Protokoll
Das Click-iT® Plus EDU-Protokoll basiert auf den Schritten zur Aldehydfixierung und Detergenzipermeabilisierung für die immunhistochemische Antikörpermarkierung. Jedoch ist EdU mit anderen Fixierungs-/Permeabilisierungswirkstoffen, einschließlich Saponin und Methanol, kompatibel. Nur fünf Arbeitsgänge sind zur Vorbereitung Ihrer Zellproliferationsdaten-Analyse erforderlich:

1. Behandlung von Zellen mit EdU.
2. Fixieren und Permeabilisieren von Zellen.
3. Nachweis von S-Phase-Zellen mit Click-iT® Plus Nachweis-Cocktail für die Dauer von 30 Minuten.
4. Einmal waschen.
5. Analysieren.

Ergebnisse stehen unter bestimmten Umständen bereits nach 60 Minuten zur Verfügung, wir empfehlen jedoch 90 Minuten für alle Anwendungen.