Die Flp-In™-Zelllinien sind für die schnelle Erzeugung stabiler Zelllinien entwickelt, die das Protein von Interesse aus dem Flp-In™ Expressionsvektor exprimieren. Die Zellen enthalten eine einzelne stabil integrierte FRT-Stelle an einem transkriptionsaktiven Genomlocus. Die gezielte Integration eines Flp-In™-Expressionsvektors gewährleistet eine starke Expression des Gens von Interesse. Es sind sechs Flp-In™-Zelllinien für die Erzeugung isogener stabiler Zelllinien und eine Flp-In™ T-REx™ Zelllinie für die Erzeugung von Tetracyclin-regulierten stabilen Zelllinien erhältlich. Flp-In-CV-1, Flp-In™-293, Flp-In-BHK, Flp-In-Jurkat und Flp-In™-3T3-Zelllinien wurden durch die Transfektion der Elternzelllinien mit pFRT/lacZeo und die Auswahl für stabile Zeocin™-resistente Klone erstellt. Die Flp-In™-CHO-Zelllinie wurde durch die Transfektion von CHO-Zellen mit pFRT/lacZeo2 und die Auswahl für Zeocin™-resistente Klone erstellt. Die Flp-In™ T-REx-293-Zelllinie enthält pFRT/lacZeo und pcDNA™6/TR (aus dem T-REx™ System) stabil integriert. Die Co-Transfektion der Flp-In™-Zelllinien mit einem Flp-In™-Expressionsvektor und dem FLP-Rekombinase-Vektor pOG44 führt zu einer gezielten Integration des Expressionsvektors in denselben Locus in jeder Zelle, wodurch homogene Ebenen der Genexpression gewährleistet werden.

Auswahl Ihrer Flp-In™ Vektor/Zelllinien-Kombination
Die Flp-In™-CV-1, Flp-In™-293, Flp-In™-CHO und Flp-In™-Jurkat-Zelllinien (Abbildung 1) funktionieren gut mit Flp-In™-Vektoren, die ein Gen vom CMV-Promotor exprimieren (pcDNA™5/FRT, pcDNA5/FRT/V5-His-TOPO™ und pSecTag/FRT/V5-His-TOPO™). Flp-In™-BHK- und Flp-In™-3T3-Zellen neigen dazu, den CMV-Promotor nach unten zu regulieren. Daher wird empfohlen, die Flp-in™-Vektoren, die den EF-1α-Promotor (pEF5/FRT/V5-DEST™ und pEF5/FRT/V5-D-TOPO™) enthalten, mit diesen Zelllinien zu verwenden.