Phospha-Light™ SEAP Reporter Gene Assay System

Das Phospha-Light™ Assay-System ist ein chemoilumineszierende Reportergen-Assay für den empfindlichen Nachweis von sezernierter humaner plazentaler alkalischer Phosphatase, die als Reporterprotein verwendet wird.

• Der Nachweis des sezernierten Reporters ermöglicht die Analyse, ohne wertvolle Zellen zu zerstören.
• Der große Dynamikbereich des Assays alkalischer Phosphatase ermöglicht dem Anwender die präzise Messung des Enzympegels in einem Bereich von Femtogramm bis Nanogramm.
• Die Empfindlichkeit des Assays ist 100- bis 1.000-mal höher als bei isotopischen⁄nicht isotopischen Assays für Chloramphenicol-Acetyltransferase (CAT) oder bei kolorimetrischen⁄Fluoreszenz-Assays für b-Galactosidase. Dieser Assay bietet somit eine höhere Empfindlichkeit als vergleichbare Assay-Technologien.
• Der hochempfindliche Assay mit großem Dynamikbereich ermöglicht den Nachweis hoher und niedriger Reportermengen, ohne die Probe mehrfach verdünnen zu müssen.
• Das nicht radioaktive Reportergen-Assay-Kit beseitigt Bedenken hinsichtlich der Verwendung von Radioisotopen.
• Der Assay kann in etwa einer Stunde abgeschlossen werden, was eine schnelle Testdurchführung ermöglicht.

Expression im Zeitverlauf überwachen
Das Phospha-Light™ Assay-System ermöglicht den empfindlichen Nachweis des sezernierteren Reporterproteins alkalischer Phosphatase (SEAP) in Zellkulturmedien. Das SEAP-Genprodukt ist eine verkürzte Form der humanen plazentaren alkalischen Phosphatase. Durch das sezernierte Reporterprotein wird die Vorbereitung von Zellextrakten überflüssig. Eine Zellpopulation kann im Zeitverlauf überwacht werden und bleibt für weitere Experimente intakt.

Proprietäre Reagenzien für hochempfindlicher Detektion
Das Phospha-Light™ Assay-System gehört zu den einfachsten und schnellsten Methoden zur Optimierung der Transfektionseffizienz. Der mit dem Phospha-Light™ Assay erzielte hochempfindliche Nachweis wird durch die Kombination proprietärer Reagenzien erzielt. Das System umfasst leistungsfähige CSPD™ Substrate der alkalischen Phosphatase, Emerald™ Lumineszenz-Verstärker und ein einzigartiges Puffersystem, das speziell auf die Aktivitätshemmung nicht plazentarer endogener alkalischer Phosphatase ausgelegt ist. Das anhaltende Leuchten des Chemolumineszenzsignals ermöglicht den Einsatz von Luminometern ohne Injektoren für die Messung.

Anwendungen
Das Phospha-Light™ Reportergen-Assay-System kommt weitverbreitet wurde in Reportergen-Assays häufig zur Messung der Genexpression in etablierten Zelllinien und transfizierten Primärzellen eingesetzt, einschließlich als Gen-Knockdowen⁄RNA-Störungswert. Der Phospha-Light Reportergen-Assay wird für viele verschiedene viralen Funktions-Assays verwendet, einschließlich viraler Genexpressionsassays, viraler Replikation, viraler Fusogenität, Virusneutralisierung, viral vermittelter Zellzellfusion sowie viraler Infektiosität. Die Verwendung des SEAP-Reporterproteins ist sehr gut für In-vivo-Reportergen-Assays geeignet, indem Serumproben von transgenen, transfizierten oder mit viralen Vektoren infizierten Tieren getestet werden. Das Phospha-Light Reportergen-Assay-System wird außerdem zur Messung der SEAP-Konzentration in Seren transgener oder transfizierter ganzer Tiere, darunter in Seren von Mäusen, Ratten, Marmosetten, Affen und Schweinen, sowie in der Allantoinflüssigkeit von Hühnern eingesetzt. Erst kürzlich wurde das SEAP-Protein in Mäusen (mSEAP) zur Verbesserung der Stabilität des SEAP-Proteins bei transgenen Mäusen entwickelt, wobei das Phospha-Light™ System für den empfindlichen Nachweis von mSEAP eingesetzt wurde. Diese und weitere Referenzen finden Sie in unserer Bibliographie im Abschnitt Literatur⁄Ressourcen.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für die Diagnostik bestimmt.