Los kits de traducción in vitro (IVT) humana de alto rendimiento Thermo Scientific de 1 paso permiten la expresión de proteínas funcionales con un rendimiento por ml entre 10 y 100 veces superior al de otros sistemas de IVT de mamíferos.

El sistema IVT de alto rendimiento de 1 paso utiliza extractos de células HeLa modificados para aprovechar la robusta maquinaria de traducción humana y generar proteínas funcionales de longitud completa. En este sistema, la expresión de proteínas se realiza en un dispositivo de diálisis patentado que permite un suministro continuo de nucleótidos, aminoácidos y sustratos generadores de energía en la reacción, al tiempo que elimina inhibidores de la síntesis de proteínas. Este sistema sin células de intercambio continuo (CECF) permite la expresión de proteínas en una incubación nocturna de hasta 750 µg/ml. El kit completo de escala máxima incluye todos los componentes necesarios para la transcripción y traducción de un gen recombinante, incluido un vector de expresión optimizado.

Características del kit Maxi IVT humana de alto rendimiento de 1 paso:

• Alta expresión: hasta 750 µg/ml de proteína expresada
• Reproducibilidad: baja variabilidad entre experimentos
• Rápido: niveles altos de expresión de proteínas con 6 horas de incubación durante la noche
• Funcional: obtenga proteínas activas funcionalmente, incluyendo aquellas que contienen enlaces de disulfuro

Expresión de proteínas en 1 paso:
• Facilidad de uso: la transcripción y traducción se realizan en una reacción de un paso
• Adaptado para etiquetado: apto para la incorporación de aminoácidos pesados o no naturales

Incluye:
• Los kits completos contienen lisado celular, mezcla de reacción, proteínas accesorias, tampón de diálisis 5X, ADN de control, vector de clonación, dispositivos de diálisis y tubos de centrífuga

Requieren:
• Incubadora de 30 °C o baño de agua (agitador con baño de agua que aumenta la expresión entre un 30 y un 50 %)

Aplicaciones:
• Producción de proteínas recombinantes para análisis estructural
• Genera proteínas activas para estudios de interacción de proteínas
• Obtén una caracterización y expresión rápidas de proteínas mutantes
• Producción a pequeña escala de partículas virales
• Incorporación de aminoácidos no naturales o producción de proteínas tóxicas

Los kits de IVT humana de alto rendimiento de 1 paso son sistemas de expresión de proteínas libres de células que proporcionan todos de los componentes esenciales necesarios para la transcripción y la traducción. Los kits se han optimizado con proteínas accesorias y mezclas de reacción que soportan la síntesis de proteínas usando una plantilla de ADN. Las ventajas de utilizar los kits de IVT humana de alto rendimiento de 1 paso en comparación con los sistemas de expresión in vivo tradicionales incluyen la capacidad para expresar proteínas tóxicas o insolubles, realizar fácilmente el etiquetado de proteínas con aminoácidos modificados y reducir el tiempo y el coste de la expresión de proteínas humanas en células de cultivo tisular. Los kits de IVT humana de 1 paso están optimizados para su uso con el vector de expresión pT7CFE1 que utiliza el promotor viral T7 y un sitio de entrada al ribosoma interno (IRES) del virus de la encefalomiocarditis (EMCV) para facilitar altos niveles de expresión de proteínas in vitro. El uso de un vector pT7CFE es fundamental para obtener altos niveles de expresión. Para mayor comodidad, en la familia de vectores pT7CFE hay disponibles etiquetas de afinidad en tándem para facilitar la detección y purificación de proteínas. (Para opciones de detección y escala más pequeñas, considere el uso del kit de IVT de acoplamiento humano de 1 paso.)

Más datos de producto
• Selección de un método de purificación y vector para la expresión de proteínas in vitro
• Sistema para una traducción in vitro de alto rendimiento
• Expresión de proteínas altamente activas mediante un sistema de IVT humano sin células