Master Mix pour PCR vert Platinum™ SuperFi II
Invitrogen™

Master Mix pour PCR vert Platinum™ SuperFi II

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Le mélange Invitrogen Platinum SuperFi II Green PCR Master Mix (2X) contient un mélange prêt à l’emploi de l’ADN polymérase Platinum SuperFi II, du tampon Platinum SuperFi II et des dNTP pour une configuration PCR pratique, ainsi que deux colorants de suivi pour le chargement direct des produits PCR sur gels. L’ADN polymérase Platinum SuperFi II est une ADN polymérase de correction qui associe une fidélité supérieure à un tampon SuperFi II innovant, permettant une hybridation d’amorce universelle pour un succès optimal en PCR. Il est parfaitement adapté au clonage, à la mutagénèse et à d’autres applications bénéficiant d’une précision de séquence suprême.

Caractéristiques du mélange Platinum SuperFi II Green PCR Master Mix :
• Fidélité exceptionnelle >300X Taq
• Hybridation d’amorces universelles à 60°C
• Une spécificité, une sensibilité et des rendements supérieurs
• Amplification robuste des cibles difficiles à amplifier (par exemple, celles ayant une pureté sous-optimale, une teneur en GC > 65 %, une exigence d’une PCR longue)

L’ADN polymérase Platinum SuperFi II est une enzyme à haute processivité avec une résistance accrue aux inhibiteurs de la PCR. Elle permet également des protocoles de cyclage rapide et l’amplification de cibles longues (jusqu’à 20 kb). La technologie de démarrage à chaud Platinum est basée sur des anticorps exclusifs qui inhibent l’activité enzymatique jusqu’à l’étape initiale de dénaturation de la PCR, empêchant ainsi l’amplification et la dégradation d’amorces non spécifiques. Cette technologie permet également la configuration de la réaction à température ambiante et offre une sensibilité et un rendement accrus.

En raison de la composition unique du tampon PCR SuperFi II, la température d’hybridation est de 60°C pour la plupart des paires d’amorces conçues selon les règles générales de conception. L’isostabilisation des molécules dans le tampon augmente la stabilité du duplex amorce-modèle pendant l’étape d’hybridation et améliore la spécificité sans qu’il soit nécessaire d’optimiser la température d’hybridation pour chaque paire d’amorces. Avec l’ADN polymérase Platinum SuperFi II, différents dosages PCR peuvent être effectués dans le même cycle en utilisant le même protocole avec une température d’hybridation d’amorce universelle et l’étape d’extension sélectionnée pour le fragment le plus long à amplifier.

Applications de l’ADN polymérase Platinum SuperFi II :
• PCR haute fidélité
• Clonage et sous-clonage
• Mutagénèse dirigée
• Amplification des modèles riches en GC
• Génération de modèles pour le séquençage
• PCR à haut débit
• Amplification des échantillons avec une pureté sous-optimale
• PCR longue
• PCR rapide

Le mélange Platinum SuperFi II PCR Master Mix est également disponible. Il s’agit du même Master Mix sans les colorants de suivi.

Plus d’informations sur les produits d’ADN polymérase Platinum SuperFi II ›
Spécifications
CouleurColorless
Fidélité (par rapport à Taq)> 300X
Hot StartFonctionnalité Hot-Start (démarrage à chaud) intégrée
Nbre de réactions5 x 500 réactions
En surplombArrondi
PolyméraseADN polymérase Platinum SuperFi II
Type de produitMaster Mix de PCR
Quantité5 x 500 reactions
Format de réactionSuperMix ou Master Mix
Conditions d’expéditionGlace carbonique
Taille (produit final)20 kb ou moins
Concentration2X
À utiliser avec (application)Hot-start PCR, High-fidelity PCR
GC-Rich PCR PerformanceÉlevé
Vitesse de réactionRapide
Unit SizeEach
Contenu et stockage
Cinq boîtes de Master Mix Platinum SuperFi II, chacune contenant :
• 10 x 1,25 ml de Master Mix PCR Platinum SuperFi II
• 10 x 1,25 ml d’eau, sans nucléase

Suffisant pour 2 500 réactions de 50µl

Foire aux questions (FAQ)

How much volume of the Platinum SuperFi II PCR Master Mix (2X) or Platinum SuperFi II PCR Green Master Mix (2X) should I use per reaction?

Typically, for a 50 µL PCR reaction, we recommend using 25µµL of the 2X master mix so that its final concentration in the reaction is 1X.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our PCR and cDNA Synthesis Support Center.

What are your recommendations when working with long amplicons using Platinum SuperFi II DNA Polymerase?

Good lab practices are important for long fragment amplification. These include using high-quality templates (pure, fresh, and intact) and fresh primer solutions. Reducing primer concentration to 0.2 µM may also improve the results.

Can I use Platinum SuperFi DNA Polymerase cycling protocol and primer annealing temperature with Platinum SuperFi II DNA Polymerase?

Yes, Platinum SuperFi II DNA Polymerase works at both universal 60 degrees C annealing temperature and at annealing temperatures calculated with a Tm calculator.

Can I perform TA cloning with Platinum SuperFi II DNA Polymerase?

Platinum SuperFi II DNA Polymerase produces blunt-ended PCR products that can be cloned directly into blunt-ended cloning vectors. TA cloning is also possible if 3' dA-overhangs are added after PCR. We recommend purifying the PCR products of Platinum SuperFi DNA Polymerase before adding the overhangs. The procedure for adding 3' dA-overhangs (TA cloning) includes the following steps:
- Purify the PCR product (e.g., with a PCR purification kit or phenol extraction/DNA precipitation). Before adding the overhangs, PCR product must be purified, as the strong proofreading activity of any remaining Platinum SuperFi DNA Polymerase will degrade the added 3' dA-overhangs.
- Perform 3' dA addition with a Taq DNA polymerase.
Reaction components:
Purified PCR product
0.2 mM dATP
1x Taq Buffer
1 U Taq DNA Polymerase
Incubate the reaction for 20 min at 72 degrees C.
- Proceed to TA cloning. For optimal ligation efficiency, we recommend using fresh PCR products, since 3' dA-overhangs can be lost during storage

Can I perform restriction digestion in the Platinum SuperFi II reaction buffer?

Platinum SuperFi II reaction buffer is compatible with restriction digestion directly after PCR. Note that Platinum SuperFi II DNA Polymerase is not inactivated during PCR, thus purification of PCR products before restriction digestion is recommended if intact 5'- or 3'- overhangs are needed for cloning.

Citations et références (14)

Citations et références
Abstract
A PCR amplicon-based SARS-CoV-2 replicon for antiviral evaluation.
Authors:Kotaki T, Xie X, Shi PY, Kameoka M
Journal:Sci Rep
PubMed ID:33500537
'The development of specific antiviral compounds to SARS-CoV-2 is an urgent task. One of the obstacles for the antiviral development is the requirement of biocontainment because infectious SARS-CoV-2 must be handled in a biosafety level-3 laboratory. Replicon, a non-infectious self-replicative viral RNA, could be a safe and effective tool for ... More
Engineering SARS-CoV-2 using a reverse genetic system.
Authors:Xie X, Lokugamage KG, Zhang X, Vu MN, Muruato AE, Menachery VD, Shi PY
Journal:Nat Protoc
PubMed ID:33514944
'Reverse genetic systems are a critical tool for studying viruses and identifying countermeasures. In response to the ongoing COVID-19 pandemic, we recently developed an infectious complementary DNA (cDNA) clone for severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2). The reverse genetic system can be used to rapidly engineer viruses with desired ... More
The analysis of GSTA1 promoter genetic and functional diversity of human populations.
Authors:Mlakar V, Curtis PH, Armengol M, Ythier V, Dupanloup I, Hassine KB, Lesne L, Murr R, Mlakar SJ, Nava T, Ansari M
Journal:Sci Rep
PubMed ID:33658540
'GSTA1 encodes a member of a family of enzymes that function to add glutathione to target electrophilic compounds, including carcinogens, therapeutic drugs, environmental toxins, and products of oxidative stress. GSTA1 has several functional SNPs within its promoter region that are responsible for a change in its expression by altering promoter ... More
Epigallocatechin-3-gallate Alleviates Vanadium-Induced Reduction of Antioxidant Capacity via Keap1-Nrf2-sMaf Pathway in the Liver, Kidney, and Ovary of Laying Hens.
Authors:Ma Y, Shi Y, Wu Q, Ma W
Journal:Biol Trace Elem Res
PubMed ID:33405082
'This study evaluated the effect of epigallocatechin-3-gallate (EGCG) alleviating the reduction of antioxidant capacity induced by dietary vanadium (V) in the liver, kidney, and ovary of laying hens. Furthermore, Kelch-like ECH-associated protein 1(Keap1)-nuclear factor erythroid 2-related factor 2 (Nrf2)-small Maf proteins (sMaf) pathway was explored to reveal the molecular mechanism. ... More
Human Ubiquitin-Specific Peptidase 18 Is Regulated by microRNAs
Authors:Rubino E, Cruciani M, Tchitchek N, Le Tortorec A, Rolland AD, Veli Ö, Vallet L, Gaggi G, Michel F, Dejucq-Rainsford N, Pellegrini S
Journal:Front Genet
PubMed ID:33633774
'Ubiquitin-specific peptidase 18 (USP18) acts as gatekeeper of type I interferon (IFN) responses by binding to the IFN receptor subunit IFNAR2 and preventing activation of the downstream JAK/STAT pathway. In any given cell type, the level of USP18 is a key determinant of the output of IFN-stimulated transcripts. How the ... More